葛根粉中总黄酮的提取和测定
一、实验目的：
⒈ 熟悉超声波提取葛根粉中总黄酮的操作；
⒉ 比较紫外吸收与可见分光光度法测定总黄酮方法的相关性。
二、实验原理：
试样经超声波用无水甲醇提取其中的总黄酮，
①紫外吸收法：经扫描其紫外吸收光谱后，在紫外最大吸收波长下测定吸光度，根据标准曲线法定量；
②可见分光光度法：利用黄酮分子中的酚羟基在弱碱性条件下与铝离子发生铬合反应生成有色物质，在一定浓度范围内，其吸光度与总黄酮浓度成线性关系，标准曲线法定量。
三、主要仪器和试剂：
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⒈ 紫外-可见分光光度计； ⒉ 超声波发生器； ⒊ 电子天平；
⒋ 芦丁标准溶液：精确称取10mg于120℃烘干至恒重的芦丁标样，以无水甲醇溶液超声溶解并定容至50ml摇匀即得浓度为0.2mg/ml芦丁标准液。
⒌ 硝酸铝溶液（100g/L）：称取10g硝酸铝加水溶解并稀释到100mL。 ⒍ 乙酸钾溶液（98.1g/L）：称取9.81g乙酸钾，加水溶解并稀释至100mL。
四、实验步骤： ⒈ 样品中总黄酮提取：
准确称取2.0g（精确到0.1mg）葛根粉于150mL锥形瓶中，加入无水甲醇40mL，在60℃超声提取1h，抽滤，收集滤液于100mL容量瓶中，滤渣重新置于原锥形瓶内再加入甲醇40mL，在60℃超声提取1h，抽滤，合并滤液，无水甲醇定容，摇匀。
⒉ 紫外吸收测定：
①准确吸取芦丁标准液0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，3.00mL于25mL容量瓶内，分别用无水甲醇定容，摇匀。
②选取第四管溶液，以无水甲醇为参比液，扫描紫外吸收光谱，找出最大吸收波长λ
max。 max
③在λ处，分别测定标准系列和样品提取液的吸光度，计算样品测定液中
总黄酮含量。
⒊ 可见分光光度法测定：
①准确吸取芦丁标准液0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，3.00mL于25mL容量瓶内，加无水甲醇至6mL，分别加入硝酸铝溶液（100g/L）1 mL，乙酸钾溶液（98.1g/L）1 mL，用无水甲醇定容，摇匀，静置30min。
②吸取样品提取液1.0mL于25mL容量瓶内，加无水甲醇至6mL，分别加入硝酸铝溶液（100g/L）1 mL，乙酸钾溶液（98.1g/L）1 mL，用无水甲醇定容，摇
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匀，静置30min。
③在λ=420nm处，分别测定吸光度，计算样品测定液中总黄酮含量。
五、数据处理：
X?c?100
m?d?1000X——试样中总黄酮的含量，单位为g/100g； c——由标准系列测出样品测定液中芦丁的质量，mg； m——试样质量，g； d——稀释倍率。