Beijing Leagene Biotechnology Co., Ltd.
细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)
产品简介：
自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞食物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物，损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，可靶向长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质组分并通过溶酶体途径进行降解。自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。
单丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC )是一种荧光色素，是嗜酸性染色剂，通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm。Leagene细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的自噬染色，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。
产品组成：
编号 DA0041 名称 100T Storage 试剂(A): MDC Stain(500×) 试剂(B): Stain buffer 试剂(C): Wash buffer 使用说明书 30μl 50ml 250ml -20℃ 避光 4℃ 4℃ 1份 自备材料： 1、 低速离心机 2、 1.5ml离心管 3、 载玻片、盖玻片 4、 荧光显微镜
操作步骤(仅供参考)：
(一)玻片法
1、 收集细胞，用300～500μl的Wash buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，
弃上清。
2、 加入适量的Stain buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。
3、 取5μl MDC Stain(500×)加至245μl Stain buffer，混匀，即为MDC Stain(10×)。
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4、 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μl的MDC Stain(10×)，轻轻混匀。 5、 37℃或室温避光染色15～45min。
6、 800～1000g离心5min，弃上清，收集细胞，用300～500μl的Wash buffer清洗细
胞2次，800～1000g离心5min，弃上清。
7、 加入100μl的Wash buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。
8、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。 (二)96孔板法
1、 配制MDC染色工作液：按MDC Stain(500×)：Stain buffer=1：499的比例混合，即为MDC染色工作液。如不能及时用完，应-20℃避光保存。
2、 轻轻吸除96孔板中的培养液，加入100μl MDC染色工作液至各孔，37℃ 5%CO2避
光孵育15～60min。 3、 各孔加入100μl Wash buffer清洗2～3次。 4、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长355nm，阻断滤光片波长512nm)，计数并拍照。 (三)MDC与EB双染法 1、 收集细胞，用300～500μl的Wash buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，
弃上清。 2、 加入适量的Stain buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106/ml。 3、 取5μl MDC Stain(500×)加至245μl Stain buffer，混匀，即为MDC Stain(10×) 4、 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μl的MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液，轻轻混匀。 5、 滴加于在玻片上，室温避光染色15～30min，加盖玻片。 6、 荧光显微镜下观察(激发滤光片波长512nm)，计数并拍照。 染色结果： 正常细胞 凋亡细胞 细胞被均匀染成黄绿色荧光 染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒 注意事项： 1、 MDC Stain和EB对人体有一定害处，请小心操作。 2、 AO常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 3、 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。
有效期： 12个月有效。
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