大豆子叶愈伤组织诱导
班级:种子10-1 学号:20100566 姓名:贺亚伟
摘要:大豆作为一种重要的经济作物和重要的油料作物，在现在国际贸易中成为仅次于玉米，小麦之后的第三大宗农业商品，在国民经济中扮演越来越重要的作用了，在居民饮食中作用很重要。本实验采用组培法对大豆子叶愈伤组织进行诱导，探究该方法的可行性。采用不同浓度的NAA和6-BA[1]，研究其对大豆子叶愈伤组织诱导影响。结果表明，在一定浓度范围内，随着NAA浓度的增加，愈伤诱导率是减少的;而在一定浓度范围内，随着6-BA浓度增加，愈伤诱导率却是在增加的。所以，适宜浓度的不同NAA和6-BA对大豆子叶愈伤组织的诱导是有效的。
关键词: 大豆子叶 愈伤组织 诱导
大豆是一年生草本植物，是世界上最重要的豆类。大豆起源于中国，中国学者大多认为原产地是云贵高原一带。大豆是豆科植物中最富有营养而又易于消化的食物，是蛋白质最丰富最廉价的来源。在今天世界上许多地方是人和动物的主要食物。大豆在各类土壤中均可栽培，但在温暖、肥沃、排水良好的沙壤土中生长旺盛。晚霜过后播种，大豆含有丰富的优质蛋白、不饱和脂肪酸、钙及B族维生素是我国居民膳食中优质蛋白质的重要来源。大豆蛋白质含量约为35%—40%，除蛋氨酸外，其余必需氨基酸的组成和比例与动物蛋白相似，而且富含谷类蛋白质缺乏的赖氨酸，是与谷类蛋白质互补的天然理想食品。采用组培方法研究大豆的诱导实验，对于大豆的基因转化[2-3]利用和
研究提供了新的途径。 1，实验材料和方法 1，1材料
大豆子叶由四川农业大学植物生理系提供 。 1，2,试验方法 1，2，1,培养基配方
表1 培养及配方(g)
序号
MS大量
MS微
MS微
铁盐
有机物
甘氨酸
6-BA(mg
NAA(
2，KT
肌
蔗糖
琼脂
4-D(mg醇
(mg)
量I 量
II
mg) (mg)
)
(mg) )
1 2 3 4
50 50 50 50
5 5 5 5
0.5 0.5 0.5 0.5
5 5 5 5
0.5 0.5 0.5 0.5
1 1 1 1
2.0 4.0
0.2 ---- ---- 100 30 5 5 5 5
O.2 ---- ---- 100 30
1.0 1.0
100 30 100 30
---- ---- 2.0 ---- ---- 4.0
1 ，2 ，2 培养基的制备MS培养基[4](配制1000mL溶液) 1，量取液体
称取MS大量元素50g，MS微量元素I 5g，MS微量元素II5g，铁盐5g，有机物5g，甘氨酸1g。 2，称量蔗糖，肌醇和琼脂
在电子天平上，各称取4份蔗糖，肌醇和琼脂，质量分别是30g，100mg和5g。
3，溶液的熬制
将1和2中的物质混合在铁杯子里，在电炉上加热沸腾;铁盐要用杯子单独熬制溶解。之后将铁盐和琼脂加入含1和2物质的铁杯子里，并不断用玻棒搅拌混溶，防止产生沉淀，至溶液澄清透明为准。 4，定容
将熬制的溶液倒入1000mL容量瓶中，蒸馏水3-4次冲洗杯子，冲洗液倒入容量瓶中，之后用蒸馏水定容1000mL。 5，调节PH
用玻棒蘸取溶液，点在PH试纸上，若偏酸性，用胶头滴管滴入NaOH 溶液;偏碱，用胶头滴管滴入HCl 溶液 。使最终的PH达到5.8为适宜。
6，溶液分装
每组溶液分装在35只试管中，并做好标记，每管大约12mL 。需要装4组共140只管。 1，2，2高压锅灭菌 1，2，2，1,无菌皿制作
将剪好的圆形滤纸放在培养皿中，盖好盖子，并用干净的报纸包好，待灭菌。
1，2，2，2,无菌水的制作
用无菌水洗刷瓶子多次后，倒入瓶内2/3无菌水，拧好盖子。待用。 1，2，2，3,高压锅灭菌
将制作的培养基，无菌皿，无菌水和其他接种需要的器材(镊子，手术刀，瓶子等)，一起放入高压灭菌锅内，在121摄氏度下灭菌20
分钟，冷却后取出放在无菌柜里待用。 1，2，3,消毒 1，2，3，1 大豆子叶的消毒
将新鲜的大豆子叶用75%乙醇溶液浸泡叶片30分钟左右，冲洗3-4无菌水后，再在0.1%升汞中浸泡8分钟左右，用无菌水冲洗4-5次之后，放在消毒的无菌皿上待用。 1 ，2 ，3 ，2 实验人员的消毒
操作人员进入接种室之前，换上鞋套，头套，口罩和工作服。操作之前，用75%乙醇对手和胳膊进行多次擦拭消毒。 1 ，2 ，4 接种
把消毒的子叶用刀片切成1CM2大小的小块。迅速将培养瓶的封口在酒精灯前取下，放入切好的子叶，迅速封口。接种完成的培养瓶放在适宜的培养室里培养。 1 ，2 ，5 接种后的培养条件
培养室温度为21-25摄氏度;光照:培养中光照1500-2000Lx。 1 ，2 ，6 注意事项
接种在超净工作台上进行，且在实验前应用紫外灯消毒4个小时左右。所用的器材包括镊子，刀片等彻底消毒，以确保无菌操作，达到成功。同时，在操作期间，不得将手伸出台面;如有必要，则需进行再次乙醇消毒。 2 ，实验结果与讨论
2 ，1实验结果
表2 不同浓度植物激素对大豆子叶诱导影响
序号
接种数 污染数 存活数 愈伤数 愈伤诱颜色
导(%)
1 2 3 4
45 28 28 76
20 6 8 22
19 21 20 52
15 22 23 59
33.3 78.6 82.1 77.6
淡黄 黄绿 淡黄 淡黄
致密 致密 致密 致密
率
愈伤长势
2 ，2 实验结果的比较分析
比较分析:由表2和表3实验结果可以看出，当6-BA/NAA比值大于1时，随着6-BA浓度在一定范围内的增加，诱导率在逐渐增加，由33.3%增加到78.6%。而且，颜色由淡黄到黄绿的变化，说明了随着6-BA的增加，促进了愈伤组织的诱导成功率，增强了愈伤组织的生长速度。
表3 不同浓度6-BA对大豆子叶诱导的影响
序号 1 2
6-BA(mg/L) NAA(mg/L) 诱导率(%) 2.0 4.0
0.2 0.2
33.3 78.6
比较分析:有表2和表4实验结果可以看出，当KT/2，4-D小于1时，随着2，4-D浓度在一定范围内的增加，诱导率下降了，由82.1%减少到77.6%。生长状况都差不多是淡黄色。在这个比较中，说明了