1.2.7 乳鼠感染模型的建立 将乳鼠随机分组,各
图2 抗O157:H7IgY薄层扫描图谱
Fig.2 ThearrowindicatesthepositionofIgYantibody
图1 SDS-PAGE检测抗O157∶H7IgY
Fig.1 TestofIgYofanti-O157:H7bySDS-PAGE
1.standardIgY(Promega公司)2.supernatant
afterab2stractingIgY3.abstractedIgY
组采用不同剂量的活菌经肠道攻击,选择乳鼠72h
抗大肠杆菌O157_H7鸡卵黄抗体的制备及其被动保护作用的研究
2002,18(2)
中国人兽共患病杂志ChineseJournalofZ
oonoses
19
2.3 IgY抗体蛋白含量的测定 经检测,所提抗体
的蛋白含量为50～60mg/ml,每只鸡蛋可提取抗体50-60mg。
2.4 IgY毒性的测定 小鼠一次性口服60mg抗
动物,按常规方法进行免疫,免疫效果较好。IgY的
提取采用了脱脂、盐析、脱盐、浓缩的技术路线。在抗体提取时,经过多次试验,找出了IgY的提取的
9〕
适宜条件。在IgY毒性试验中,我们根据文献〔提供的治疗剂量(80～300mg/Kg)的10～40倍进行试验,没有发现毒性反应,说明其安全性好。有研究证明,大肠杆菌对动物的致病性与动物年龄相关,本文在建立动物肠道感染模型时,经多次试验也发现昆明鼠及BALB/c成年鼠对O157∶H7不敏感,而昆明
体,活动饮食正常,未出现不良反应。
2.5 乳鼠感染模型的建立 一次性给予5×108活菌攻击,约12h出现腹泻,72h内,乳鼠100%死亡。2.6 动物被动保护试验 动物存活情况如下表1。
表1 IgY的乳鼠被动保护试验
Table1 PassiveprotectivetestofsuckingmiceofIgY
GroupControlIgYtreatment
Amountof
animal
88
Amountofdeath
82
Amountofsurvive
06
系乳鼠对此菌敏感,所建立的乳鼠肠道感染模型具有敏感、稳定、重复性好的特点,为研究O157∶H7的致病机理、感染免疫以及被动免疫保护作用打下了基础。乳鼠被动免疫保护试验结果表明口服IgY抗体对O157∶H7感染的乳鼠模型具有明显的保护作用,这为O157∶H7的防治及其它肠道传染病的被。4 11,EnterohemorrhagicEscherichia-an].AmFamPhysician,1997,2TA,UmezuK,etal.Preventionofrotavirusinfectionbyadministrationofcowcolostrumcontainingantihumanrotavirusantibody.Med[J].Microbiol.Immunol,1985,174∶177.
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χ2分析),二者之间有显著性差 经统计学检验(
异(P<0.01)。3 讨 论
O157∶H7属于致病性大肠杆菌,血性肠炎、腹泻、溶血性尿毒症等症状,素Stx1和Stx2,过食物传播,。文献报道在动物模型中,通过口服给予特异性抗体有良好的保护作用,抗体可来自血清,乳汁甚至单克隆抗体,但因抗体来源的昂贵阻碍了此疗法的发展。而与常规的抗体制备方法相比,从鸡蛋卵黄中制备特异性抗体具有产量高,稳定性好和制备成本低廉的优点,是大规模获得治疗用抗体的有效方法。研究发现IgY具有良好的稳定性,对胰蛋白酶和糜蛋白酶稳定,在体内吸收很少。已发现IgY能有效地预防鼠类的轮状病毒的感染,对肠产毒性大肠杆菌(ETEC)对乳猪的攻击具有保护作用,无副作用。据以上研究,本文通过制备抗O157∶H7特异性IgY抗体,在建立的乳鼠肠道感染模型中考察IgY被动免疫治疗的效果。在免疫动物时,为降低本底抗体水平,提高免疫效果,选取了SPF莱杭鸡作为免疫
(上接第133页)
21余樟友,吕跃民,等1衢州市流行性出血热流行病学调查分析
(本次调查蒙省站流行出血热实验室的大力支
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2000年3月18日收稿