实验二 大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识
大黄为泻下、健胃、清热、解毒的常用中药，品种繁多，质优者为寥科植物掌叶大黄（Rheum Palmatum L.），药用大黄（R. offIcinale Beill）和唐古特大黄（R.tanguticum Maxim.ex Balf）的根及根茎。
大黄中含有多种羟基蒽醌类化合物，它们在植物中主要以甙的形式存在，总含量为 2 ~5%，大黄中主要的羟基蒽醌类化合物有大黄酚(1)、大黄素(2)、大黄酸(3)、大黄素甲醚(4)、芦荟大黄素(5)及其甙类。
R1 R2大黄酚OHOOHH CH3OH CH3H COOHOCH3 CH3H CH2OH′大黄素大黄酸R1OR2大黄素甲醚芦荟大黄素
大黄酚（Chrysophanol）为金黄色片状结晶（乙醇或苯），mp.196-197 ℃，能升华，可溶于丙酮、乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、热苯和氢氧化钠水溶液，微溶于石油醚、乙醚，不溶于水、碳酸钠和碳酸氢钠水溶液 。
大黄素（Emodin）为橙黄色针状结晶（乙醇或冰醋酸），mp.256—257℃，能升华，易溶于稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液，可溶于乙醇、丙酮，在乙醚、氯仿、苯、四氯化碳、二硫化碳等溶剂中溶解度较小，几乎不溶于水。
大黄酸（Rheine）为黄色针状结晶（升华法），mp.321－322℃，330℃分解，易溶于碱水液、吡啶，微溶于乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、苯、石油醚。几乎不溶于水。
大黄素甲醚（Physcion）砖红色针状结晶（苯），mp.203-207 ℃，能升华，溶解性质
与大黄酚相似。
芦荟大黄素（Aioeemodin）为橙黄色针状结晶（甲苯），mp.223-224 ℃，能升华，可溶于乙醚、热乙醇、苯、稀氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液 。
羟基蒽醌甙有大黄素甲醚葡萄糖甙，大黄素葡萄甙，大黄酸葡萄糖甙, 大黄酚葡萄糖甙，大黄素-1-O-B-D-葡萄糖甙，芦荟大黄素-ω-O-B-D-葡萄糖甙。
一、实验目的
1. 掌握 PH 梯度萃取法分离酸性成分的原理及操作技术。 2. 掌握羟基蒽醌类成分的主要检识反应及薄层层析检识方法。 3. 学习从大黄中提取分离羟基蒽醌类成分的方法。
二、实验原理
根据大黄中羟基蒽醌类成分可溶于热乙醇中，故用乙醇为溶剂加热回流提取总蒽醌类成分，再利用羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，采用 pH 梯度萃取法分离，可得到各单一成分。
三、实验内容
1. 乙醇总提取物的制备
取大黄粗粉 150g, 置于 1000ml 的园底烧瓶中，加乙醇回流提取三次，第一次加 95% 乙醇 500m1,回流一小时，第二次加 95% 乙醇 300 ml，加流半小时，第三次加 95% 乙醇250 ml，回流半小时，趁热过滤，合并三次乙醇提取液，放置后，如有沉淀可再过滤一次； 滤液减压回收乙醇至糖浆状，即为乙醇总提取物；趁热转移至 250ml 的三角烧瓶中备用。
2. 总游离蒽醌的提取
在盛有乙醇总提取物的三角烧瓶中，加入乙醚 100ml，冷浸半小时，不断振摇，然后
静置，将上层乙醚液倾出，置另一500ml 三角烧瓶中，瓶内糖浆状物再同法提取 4~5 次，每次加乙醚 50ml 及丙酮2ml, 至乙自醚液颜色较浅为止，合并乙醚速提取液（注意把水层分离干净），即为含总游离蒽醌的部分，剩余物中则含有蒽醌甙类成分。
3. 游离蒽醌的分离 (1) 强酸性部分的分离：
将上述乙醚提取液转移至 500ml 的分液漏斗中，加5%碳酸氢钠水溶液（先用 pH 试纸测定其 pH 值）萃取三次，每次加5%碳酸氢钠水溶液40m1（注意萃取时放置分层的时间应稍长些，以免萃取效果不好）。合并三次碳酸氢钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至 pH2（观察萃取，酸化时溶液的颜色变化），放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，称重_______g，即为强酸性部分，主要含大黄酸，留作鉴定用。
(2) 中等酸性部分的分离：将上述经碳酸氢钠萃取过的乙醚液用 5% 碳酸钠水溶液（先用 pH 试纸测定其 pH 值）萃取 5~6 次，每次加 5% 碳酸钠水溶液 40 ml，至萃取碱液层颜色较浅为止。合并碳酸钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至 pH2，放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，称重_______g，即为中等酸性部分，主要含大黄素，留作鉴定用。
(3) 弱酸性部分的分离：将上述经碳酸钠萃取过的乙醚液用 2% 氢氧化钠水溶液（先用 pH 试纸测定其 pH 值）萃取 3~4 次，每次加 2% 氢氧化钠水溶液 20m1. 合并氢氧化钠萃取液，在搅拌下小心滴加浓盐酸调至 pH2, 放置沉淀，过滤，沉淀用水洗至近中性，干燥，称重______g，即为弱酸性部分，主要含大黄酚和大黄素甲醚，留作鉴定用。
4.蒽醌类成分的检识
(1) 碱液试验：取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各 5mg 置于小试管中，加 95% 乙醇1ml 溶解，再加 10% 氢氧化钠水溶液2~3滴，观察溶液颜色变化。凡具有邻、对位酚
羟基的蒽醌类化合物应呈紫-蓝色，其它羟基蒽醌类化合物多为红色。
(2) 醋酸镁试验：取上述分离所得游离蒽醌类化合物结晶各 5mg 置于小试管中，加 95% 乙醇 1m1 溶解，再满加0.5% 醋酸镁乙醇液 2~3 滴，观察溶液颜色变化。凡具有α-羟基的蒽醌类化合物应呈橙红色，具有间位二羟基的蒽醌昆类化合物应呈橙-红色，具有对 位二羟基的蒽醌类化合物应呈紫-红紫色，具有邻位二羟基的蒽醌类化合物应呈蓝紫色。
5. 蒽醌类成分的薄层层检识
吸附剂：硅胶 CMC-Na 硬板，于 110 ℃烘半小时。 样 品：a. 强酸性部分结晶丙酮溶液 b. 大黄酸标准品丙酮溶液 c. 中等酸性部分结晶丙酮溶液 d. 大黄素标准品丙酮溶液 e. 弱酸性部分结晶丙酮溶液 f. 大黄酚及大黄素丙酮溶液
展开剂：(1) 苯-乙酸乙酯（8：2） (2) 苯-甲醇（8：1） (3) 石油醚（30~60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）
显色剂：先在日光和紫外光灯（365nm）下检视, 为橙黄色荧光斑点，再置于氨气中熏后日光下检视，斑点变为红色。
实验四 芦丁的提取和鉴定
芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~ 16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1. 芦丁(Rutin)
淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。 溶解度：
水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热)
不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素(Quercetin)
即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。 溶解度：
乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热)
可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙
粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。