（2）蒸馏装置的各接头处必须严密不漏气。
（3）蒸馏完毕后，应先将受液瓶取下，再将水蒸气发生瓶的瓶塞放松，或将水蒸气发生瓶与检材瓶之间的连接处拆开，然后再停止加热以防各瓶之间相互倒流。
（4）对血液、面糊、稀粥等检材，可加入2～3毫升液体石蜡或适量的三氯醋酸溶液，以避免蒸馏时发生大量的泡沫溢入冷凝管。
（5）蒸馏瓶中的内容物，不能超过瓶容积的1/3。 二、氢氰酸及氰化物的鉴定方法 （一）普鲁士蓝反应：
1．原理：蒸馏出来的氢氰酸吸收在稀碱溶液中生成氰化钾，加硫酸亚铁后生成亚铁氰化钾（黄血盐），后者与溶液内亚铁氧化成高铁，在酸性条件下，化合为亚铁氰化铁，即普鲁士兰或柏林蓝。该反应是氰化物的专属反应，阳性结果可确证氰化物的存在，反应灵敏度为1：5000。
2．操作方法：取蒸馏液3～5毫升，加新配的20％硫酸亚铁2滴，加热至恰沸，加稀硫酸使成酸性，如有氰根视含量多少，溶液有蓝绿色至深蓝色。量多即析出蓝色沉淀，量少时颜色和沉淀可能要隔24－48小时后才显出。
（二）氰化物的快速检验法
检材不经水蒸气蒸馏，可直接做普鲁士兰试验。
1．原理：氢氰酸与硫酸亚铁－氢氧化钠试纸作用生成亚铁氰化物，在酸性条件下，再与由空气氧化产生的三价铁离子作用生成普鲁士兰。
6HCN+Fe2++6OH-= Fe（CN）64-+6H2O
4Fe3++3 Fe（CN）4-6＝Fe4[Fe（CN）6]3（普鲁士兰）
2．操作方法：取检材5～10克，置锥形瓶中，加适量水调成稀糊状，加10％的硫酸使之变成酸性，取滤纸一小方，滴加新配制的20％硫酸亚铁2滴及10％氢氧化钠2滴，将此滤纸覆盖于锥形瓶口，瓶底缓缓加热，待有蒸气上冒，取下滤纸，浸入6N盐酸内，如有氰根，滤纸即蓝色斑点，水洗，色斑更鲜艳。
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实验三 血中一氧化碳的检测
目的要求：熟悉一氧化碳中毒的特征和检材的采取要点，掌握碳氧血红蛋白分析鉴定方法及饱和碳氧血红蛋白的制备技术。
一、检材的采取
一氧化碳中毒检材以取血液为最好，对于尸体通常是采取心腔内血液进行检测。活体通常静脉采血并要加抗凝剂，密封。盛装检血的容器应将检血装满不要留有空间，以避免一氧化碳损失而影响检验结果。 二、碳氧血红蛋白的鉴别试验 1．煮沸法
取血2－3毫升，置试管内，放水浴锅中加热，使发生凝固。如系一氧化碳血，呈砖红色凝固体，而正常血则呈褐色或黑褐色凝块。
此法最简便，不需任何试剂，在勘验现场即可进行，但含量在40％才可测出。 2．硫化铵法
取水10毫升，加血5滴，加硫化铵5滴，较混合之，再加少量10％醋酸使微呈酸性，如系一氧化碳血，呈玫瑰色；而正常血为绿褐色。 此法灵敏，含量在10％即可检出。 3．碱液稀释法
取血1－2滴，加水稀释至1 5毫升，再加5滴10％氢氧化钠，同时取一正常血样作对照，与碱液混合后立即记下时间，正常血由于碱性正铁血红素的形成，立即变为草绿色或绿褐色而含10％以上一氧化碳血液需要15秒钟后才变为草绿色或绿褐色；含50％者需要50秒钟后。 4．钯镜试验
（1）原理：碳氧血红蛋白与硫酸作用释放出一氧化碳，一氧化碳可使氯化钯还原成钯镜。
(2)操作方法：取扩散皿(孔威氏盒)一个，内槽内放入0.5毫升0.1％氯化钯溶液，外槽内一侧放入0.5毫升检血，另一侧放入0.5毫升10％硫酸溶液（封盖前不要让它们接触)，然后盖上盒盖，轻轻摇晃使血液与硫酸充分接触。20分钟至2小时内观察试验结果，如有一氧化碳释出，可见内圈形成发亮的钯镜。
以上各鉴别试验，一定要取正常血同时做对照试验，以作对比。
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三、碳氧血红蛋白的定量检验
1．实验室中饱和碳氧血红蛋白的制备： 实验装置图见下：
1.硫酸 2.甲酸 3.血液 4.20％NaOH
一氧化碳发生装置
先将浓硫酸加热，而后扭开分液漏斗活塞，让甲酸（H－COOH）一滴一滴与浓硫酸接触，即有一氧化碳气体冒出，经过洗气瓶，通入盛有正常血的瓶中，10毫升血（用0.05克枸椽酸钠作抗凝剂）通一氧化碳约15分钟，即可使血红蛋白的一氧化碳饱和度达l00％，避免通气过猛，以免血液内产生大量泡沫外溢。因每人Hb含量不同，最好取死者血通以一氧化碳使达饱和，可省去换算。
2．吸收光谱法测定血中HbCO饱和度
在各类测定方法中，研究和应用最多的是利用可见光吸收光谱的分光光度法来测定血中HbCO饱和度。
（1）原理：双波长吸光度比值法：CO中毒的检血中同时含有HbO2、HbCO、MetHb和Hb的血，用连二亚硫酸钠使之还原后，血样中只含有HbCO和Hb两个组分，其吸收光谱是HbCO和Hb两者吸收光谱的加和。因555nm是Hb的最大吸收波长，538nm是HbCO的最大吸收波长之一，所以，随着血中HbCO饱和度的增高，555nm处的吸光度减小，而538nm处的吸光度增大，538nm处的吸光度与555nm处的吸光度之比值A538／A555也随着HbCO饱和度增高而增大，且其间也有近似直线的关系。故可用下式计算血中HbCO饱和度。用下式表示。
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(A538/A555)X－(A538/A555)0 HbCO(％) ＝ ×100％
(A538/A555)100－(A538/A555)0
上式中括号外的下角标，X表示未知HbCO饱和度的血样，0与100分别表示HbCO饱和度为0％和100％的血样。
（2）操作方法：先将非吸烟者的血样用0.1％碳酸钠溶液稀释约200倍，加入少许连二亚硫酸钠（约0.1％）后，放置15min。使HbO2还原，在538nm和555nm处测定吸光度，计算得HbCO饱和度为0％的比值。再将此溶液通入一氧化碳气体使Hb全部转变为HbCO，在相同两波长处测定吸光度，并计算出HbCO饱和度为100％的比值。检血也按上述方法稀释并加入还原剂，同样波长处测定吸光度，得出比值。将所得三个比值代入上式即可求出未知血样的HbCO饱和度。
此方法对HbCO饱和度较高的检血有较好的重现性，但不适合测定HbCO饱和度低的检血。方法对检血的稀释不要求很精确；HbCO饱和度为0％和100％的比值一次测定后，只要条件不改变，不必每次都测。通常(A538／A555)0的值为0.775，(A538／A555)100的值为1.233。
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实验四 酒精的检测
目的要求：熟悉对含酒精检材的采取保存方法，掌握酒精的常用鉴别试验。了解气相色谱理论和设备；初步熟悉应用气相色谱进行定性、定量分析的方法。
一、检材的采取保存和分离
1．乙醇中毒可取血、尿、唾液、胃内容物及呼出气为检材，其中血液为首选检材，此外还可采脑、肺、肝、肾等脏器为检材。采取血液以周围静脉血（股静脉）为宜。
2．含酒精的检材应及时检测，如不能及时检测，应放置冰箱内保存。盛装检材的容器在保存检材时应装满不要留有空间，并进行密封以避免酒精挥发损失。
3．对所有生物检材中含有的酒精可采用蒸馏法进行分离，对血、尿等液体性质检材亦可直接取样进行微量扩散和气相色谱分析，胃内容物可将其离心后取上清液直接做分析测定。
二、酒精的颜色反应 1．碘仿反应
（1）原理：碘与碱作用生成次碘酸盐，能将乙醇氧化成乙醛，乙醛与碘作用生成三碘乙醛，再与碱作用，生成黄色碘仿。
（2）操作方法：取溜液2—5毫升，放入试管内，加10％氢氧化钠溶液数滴混合。滴加碘化碘钾试剂至溶液呈浅黄色。在60℃水浴上加热，如颜色消退，再加碘液至黄色，多余的碘液可加几滴氢氧化钠除去，静置后如馏液中含有乙醇，即有黄色结晶沉淀析出，置显微镜下观察结晶呈六角形。
【注】本反应并非乙醇所特有，乙醛、丙酮、甲基酮及能被次碘酸盐氧化为乙醛，或甲基酮的醇均能产生同样反应。
2．微量扩散法――预试验
（1）原理：重铬酸钾与乙醇或其他还原性物质（醛类和其它低级分子）作用时，被还原成Cr，颜色由橙黄色转为兰绿色。
（2）操作方法：在扩散皿的内槽中放置重铬酸钾－硫酸试剂1毫升，外槽一侧加饱和碳酸钠1毫升，另一侧加入检血1毫升，盖上盒盖后，倾斜旋转使检血和碳酸钠溶液接触混合，放置一小时，观察结果，如检材内含有乙醇，以其含量大小呈现黄绿至蓝色变化，见下表1血中乙醇不同含量的颜色变化；表2血液中乙醇浓度与酩酊度。
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