结束后，要快速升温到96--98度，恒温10分钟，趁热捞出上层的渣子。用100目尼龙布过滤。
注意：加盐过多会使下一步交换吸附含量超过规定，加盐过少，肝素和蛋白质分离不完全，碱性过强，会使肝素降解破坏，收率下降。同时还能使一些蛋白质溶解度增大，造成过滤困难。碱性不足造成提取液偏酸，则在高温的情况下，肝素迅速破坏，升温过急会使蛋白质早凝固，影响肝素的分解和溶出。
6.2 吸附
待提取液温度冷至50--55度，应检测盐浓度为3。5--5%时，即可加入5%已处理号的树脂。如树脂上含有盐水，需用清水将树脂洗净控干，方可使用。搅拌吸附6--8小时，转速60--80转/分钟为宜，搅拌须使树脂上下翻动，否则吸附效果差，收率低。吸附完毕，弃去上层吸附液，然后用100目的尼龙布过滤出树脂。加入提取液的树脂量：新树脂可按提取液的5--6%加入，旧树脂可按提取液的8--10％。
6.3 洗涤
过滤后的树脂用40度左右的温水，漂洗干净。再放入与树脂重量相等的盐溶液中(盐溶液的浓度为5%左右)洗涤10--20分钟，除去低分子肝素和一些蛋白质，然后将树脂过滤。
6.4 洗脱
第一次洗脱将过滤号的树脂放入浓度为20--22%的盐溶液中搅拌洗脱5--6小时，树脂和盐水的比例为1：0。7。过滤后将树脂控干进行第二次洗脱，调盐溶液浓度为16--18%，搅拌3小时以上，树脂和盐水的比例与第一次相同，过滤后的水即是药液。
6.5 除杂
将稀碱水加入洗脱后的药液里，要快搅慢加，调PH值为10--12搅拌2分钟，静止沉淀20小时后，抽出上层药液，下沉的是杂质，且渣子放另外桶内过滤。过滤后的药液和下次药液除杂时合并待用。
6.6 沉淀
将抽出除杂后的药液加入盐酸调PH值为7—7.5，即可加入酒精进行沉淀。向药液里加入酒精要快搅慢加。(由于酒精的浓度不同，因此沉淀肝素的酒精用
量不等)用酒精计测量酒精度为30--35%，加盖密封，沉淀20小时。弃去废酒精收集糊状肝素。注意在抽出废酒精时，不可抽动沉淀的肝素。将多次生产的肝素钠浆收集在一起，以备集中脱水干燥。
6.7 脱水
将生产的肝素钠浆，用双层的确良布过滤后放入95%的酒精内浸泡20小时，加盖密封。过滤后按上述方法重复一次，使其充分的将肝素上的水分交换下来。
6.8 干燥
待肝素钠浆沥干后，放在不锈钢盘中烘干，用铲子来回的翻动，温度保持在50--55度，注意温度低于要求是不易烘干的，温度高于60度时会使肝素钠的生物活性下降。干燥后的肝素很易吸潮，应及时用双层塑料袋密封包装，于通风干燥处存放。
7. 酶解结合氧化法精制肝素工艺
本工艺采用酶解结合氧化法精制肝素，在该过程中采用低温离心技术,解决在除酸性蛋白过程中，粗品肝素钠中残留杂蛋白在纯化过程中很难被除去的缺点。在粗品肝素钠中加入胰蛋白酶对这些杂蛋白进行酶解,再结合一次氧化除杂过程,从而提高精品肝素钠的效价和效价回收率。 7.1 溶解
称取适量肝素钠粗品加质量分数3%左右NaCI溶液进行溶解。50℃水浴加热，用NaOH溶液调pH至8.0静置2小时，过滤除不溶性杂质。 7.2 酶解法除蛋白
肝素在动物体内是以肝素-蛋白质复合物的形式存在，通过酶解或盐解去除复合物的蛋白质成分，游离肝素。但在实际生产过程中，复合物的解离，蛋白质的除去是不完全的，粗品中总存在数量不等的蛋白质。粗品肝素钠必须经过精制，可以进一步去除粗品中残存的结合蛋白质，不仅因杂蛋白的去除而提高效价，而且因被“掩蔽”的肝素活性得到释放而获得较高活性。为此，利用蛋白水解酶专一水解蛋白的特点，并结合调酸除蛋白和氧化除蛋白方法,采用酶解除蛋白法，该法能在除去蛋白质时较少影响肝素总效价。
在肝素钠溶液中加入少量的胰蛋白酶，使残留在肝素中的少量蛋白质降解成小分子肽,从肝素-蛋白质复合物中解离出来，再结合调酸碱和氧化法除蛋白,制得精品肝素钠的效价和效加回收率均有不同程度提高。
酶解反应条件：蛋白酶加入量0.05%， pH 7~9， 温度40℃，反应时间5h。 7.3 调酸除蛋白
在调酸除蛋白过程中，为防止肝素失活,加入亚硫酸氢钠作保护剂。在低温下离心脱除蛋白。 7.4 氧化条件
H2O2用量2/% pH8.5，温度25~27℃，时间15h。 7.5 沉淀
将氧化液调pH6.5，加人等量的95%乙醇沉淀。抽出上清液得沉淀物，将沉淀物慢慢加无水酒精或丙酮中脱水。 7.6 干燥
55℃，真空干燥3小时以上即得精品。
采用酶解结合过氧化氢一次氧化的肝素钠精制工艺，产品较白，且效价和效价回收率均高于二次氧化方法，效价达150U/mg以上，效价回收率达95 %以上。
8.小结
肝素是结构最复杂的糖胺聚糖，其分子具有多分散性和非均相性，如何澄清其结构一直是困扰各国研究者的技术难题，因此需要应用多种分析方法和技术。目前，肝素的酶法提取，特别是对肝素的酶降解已成为研究的热点 在肝素的分离纯化方面，凝胶过滤层析、离子交换层析、亲和层析已经得到广泛应用，反相高效液相色谱法和毛细管电泳等分离纯化技术也发挥着越来越重要的作用。分离技术和光谱技术结合这一趋势，在未来肝素的研究中将发挥独特优势。
9.参考文献
[1] 李红心. 精品肝素钠的制备及效价分析[J]. 陕西科技大学学2005 23 5 32-40.
[2] 宋大巍 李雷刚 张丽萍. 胰蛋白酶水解法提取肝素工艺参数的优化研究[J]. 黑龙江八一农垦大学学报 2008 20 3 72-76.
[3] 程林坤 宋焕禄. 牦牛肺中肝素钠提取工艺条件优化[J]. 肉类研究 2010 12 37-41.
[4] Linhardt R J Dordick J S Deangelis P L et al. Enzymaticsynthesis of glycosaminoglycan heparin[J]. Semin Thromb Hemost2007 33 5 453-465. [5] Toida T Hileman R E Smith A E et al. Enzymatic preparationof heparin oligosaccharides containing antithrombin III bindingsites[J]. The Journal of Biological Chemistry 1996 271 5032040-32047.
[6] 张丽萍 宋大巍 马中苏. 超声波辅助盐析提取猪小肠中肝素的工艺[J]. 农业工程学报 2010 26 5 379-384.
[7] 宋大巍. 肝素的高效提取和分离纯化技术研究[D]. 密山黑龙江八一农垦大学 2008.
[8] Study on a Novel Extraction and Purification Technology ofHeparin and Bioactivity of Degraded Heparin[EB]. 2011-06-19 [2011-07-26]. http //www.technology-articles.org/Organic-Chemistry
-Engineering/Study
-on-a
-Novel -Extraction -and -Purification-Technology - of -Heparin - and -Bioactivity - of -Degraded-Heparin.html.
[9] Pettinger T K Owens C T. Use of low-molecular-weightheparin during dental extractions in a medicaid population [J].Journal of Managed Care Pharmacy 2007 13 1 53-58.
[10] 田亚平.生化分离技术[M].北京 化学工业出版社 2006 69-98.
[11] Viskov C Hubert P Mourier P. Low molecular weight heparins including at least one covalent bond with biotin or abiotin derivative method for making same and use thereof [P].US 20100081629 2010-04-01.
[12] Piepkorn M W Schmer G Lagunoff D. Isolation of high-activity heparin by DEAE -sephadex and protamine –sepharose chromatography[J]. Thrombosis Research 1978 13 6 1077-1087.