RNA也有一定程度上的降解。同理,分析突变型RNA主条带,突变型第2、5、9条28S rRNA条带的亮度亮于18S rRNA条带的亮度,比值应接近于2,:1,说明此三条RNA完整性相对程度高些,降解程度也相对低;突变型第1、3、6、7、8亮度比值不明显,并且RNA条带呈弥散状,说明已有部分RNA降解。通过对上图的分析,可以得出各组RNA完整性都有一定程度的丢失,RNA都有降解,只是原因或者程度不尽相同。
而通过对表格RNA纯度的测定各组数据分析得出,,OD260/OD280比值除了第五组较接近1.70,可以近似认为没被污染;第16组OD260/OD280比值为1.80,处于1.70-2.0之间,没被污染,其余数据均不处于1.70-2.0之间,由此说明可能是被蛋白或苯酚污染。另外,各组OD260/OD230比值均小于1.0,明显小于2.0.由此说明有污染,有小分子及盐的存在。通过分析有可能在提取上清液时误吸了下层液体,造成了污染,也有可能空气中、手上以及唾液含有丰富的RNase所造成的污染。
2.2目的基因的PCR扩增结果
拟南芥野生型常温、低温电泳结果图
拟南芥突变型常温、低温电泳结果图
实验结果分析:
从电泳图中可以观察到,通过对电泳带宽度和亮度的分析(由于实验失误,造成野生型低温培养组别没有试验结果,故电泳图没有电泳带,但可以根据突变组的实验结果加以推论)在常温情况下,野生型的KCS基因表达要好于突变型;在低温情况下,由于实验失误,不能进行较好的实验结果分析。通过对突变型电泳带的分析,可以看出低温胁迫下突变型拟南芥的KCS基因电泳带比常温更亮,因此可以得出低温环境对突变型拟南芥KCS基因表达有促进作用,我们可以从这个结论推断出野生型拟南芥在低温环境下也更利于KCS基因的表达。 3、 讨论
通过本次试验,我们应当意识到综合性实验团队合作的重要性,需要大家充分发挥团队协作的精神,对待实验的态度,仔细,严谨是必不可少的,特别是分子生物学这类对细微部分要求严格的实验。由于量度单位都是ul,在使用移液枪的时候也要注意移液枪的刻度,注意更换已使用的枪头,不能重复使用。
另外,由于RNase不易失活,且空气中、手上以及唾液中都含有丰富的RNase,因此在提取RNA时应该采取有效的措施,抑制和避免外源RNase的污染,同时尽量灭活或抑制内源RNase的活性。操作RNA应在RNA专用的通风厨中进行,戴上双层一次性手套,经常更换外层手套,并避免灰尘、唾液等的污染。在制备拟南芥cDNA的时候,也要严防RNase的污染。 最后,由于本次实验中存在一定的随机误差以及系统误差,导致RNA纯度分析数据的丢失以及琼脂糖凝胶电泳检测时目的基因的PCR扩增结果的电泳图不完整,对结果分析造成一定的困扰。但是我们可以通过已得实验结果加以推论得出相应的结论,在这个试验中我们得出低温胁迫对拟南芥KCS基因表达有促进作用,那我们可以得出环境因素对植物的基因表达有一定的作用,日后对植物研究以及农业生产及发展,环境是个必须考虑的因素。