1. 安装软件Primer premier5.0。
程序下载：Primer Premier 5.0 http://www.bbioo.com/Soft/2005/114.htm 2. 程序中双击打开
3. 点FILE---NEW—DNA SEQUENCE如图所示。
4. 输入目的基因片段，可以复制后用ctrl+V键拷贝到栏内，后应加数个N以备后续设计
时加酶切位点及保护碱基，如图所示。
5. 选中enzyme图标，将所选质粒上的多克隆酶切位点加入左栏
6. 选中OK键，分析目的基因中所含的酶切位点，选插入位点时就应排除这些酶
7.选中primer图标，点S图标，edit primer,开始设计正义链。
8. 软件默认引物为25个碱基
9. 可将鼠标点在设计框的3端从右向左删除7－9个碱基，保留16－18个配对
即可
10．在引物的5端加入选好的酶切位点并在其左侧加3个保护碱基，入该图加入
HIND III酶切位点及TTA保护碱基，完成后点analyze，认为可以后点OK。