装定时开关钟,一般需要每天光照10-16h,也有的需要连续照明。短日照植物需要短日照条件,长日照植物需要长日照条件。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源,这样不但可以节省能源,而且组培苗接受太阳光生长良好,驯化易成活。在阴雨天可用灯光作补充。
设备:培养架(控温控光控湿)、摇床、转床、自动控时器、紫外灯、光照培养箱或人工气候箱、
生化培养箱、边台实验台用于拍摄培养物生长状况,除湿机、显微镜、温湿度计、空调等。 (二)辅助实验室
根据研究或生产的需要而配套设置的专门实验室,主要用于细胞学观察和生理生化分析等。 1、细胞学实验室
功能:用于对培养物的观察分析与培养物的计数,对培养材料进行细胞学鉴定和研究,由制片室
和显微观察室组成。制片是获取显微观察数据的基础,配备有切片机、磨刀机、温箱及样品处理和切片染色的设备。应有通风柜和废液处理设施。显微观察室主要是显微镜和图像拍摄、处理设备。
要求:明亮、清洁、干燥、防止潮湿和灰尘污染。 设备:双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。
2、生化分析实验室
功能:培养细胞产物为主要目的的实验室,应建立相应的分析化验实验室,随时对培养物成分进
行取样检查。大型次生代谢物生产,还需有效分离实验室。
第三章 土建工程
一、组培实验室平面图
水槽 天平 冰 箱 无菌室15M2 超 净 培 养 瓶 烘 箱 仪 工 器 作 台 药 品 工 作 台 灭菌待用培养瓶架培养架 培养架 培养架 高压灭菌器 缓冲间5M2 推 拉 门 化学实验室20M2 培养室20M2
二、工程平面图(总面积26000M)
2
一楼 展览大厅 组培大楼大门
组培总仓库 二楼 洗涤及灭菌室 化 学 室 无菌操作室 缓冲室 培 养 室
组培基地
驯 化 室 苗 温 室 圃
驯化室面积100㎡,里面配有空调、加湿器、恒温恒湿控制仪、喷雾器、通风口、必要的杀虫剂等 温室:面积200㎡,有温度控制装置、通风口、杀虫工具及药剂。温室采用钢架塑料薄膜形式,薄膜每年更换一次。 第四章 组培方案
方案一:
取一、二年生的幼芽,用自来水冲洗,在无菌条件下,先用75%酒精浸泡30秒钟,然后置于
0.1%升汞溶液中处理10~一14分钟,最后用无菌水冲洗5~6次。把经过消毒灭菌后的外殖体用无菌吸水纸吸干水分,将叶片一层层剥掉,露出芽点,接种到Ms+6-BA2 mg/L+NAA0.2mg/L(单位下同)的培养基上,pH值为6.0,培养温度22~27℃,每天光照12小时,光照强度1 500—2 000Ix,15天后芽点开始萌动并生长,35天左右茎段芽点诱导成0.2.1.0 cm丛生芽数个。将诱导的丛生芽切下,接种于MS+6-BA3.0+NAA0.2的培养基中,经过约30天的培养,腋芽基部开始形成3~5个丛生状的不定芽,而愈伤组织则形成长满大量不定芽的芽块,这些芽块可用于大量增殖。将30天左右,高约3.0 em的增殖芽从芽块上切下,转人生
根培养基1/2MS+6-BA2.0+NAA0.1培养15天左右,产生1.0—3.0 cm长而粗壮的根,此时便可进行移栽,而且极易成活。 方案二:
外植体的采集、灭菌:
从田间或盆栽取回整株栀子,用自来水冲洗干净外表泥土。剥去植株外层叶片及叶鞘,
切掉植株根部和大部分叶片。用75%酒精浸泡15秒钟,再用0.1%升汞消毒15分钟,最后用无菌水冲洗4—5次。把材料纵切成两小块,用于接种。 培养基和培养方法:
采用MS为培养基,附加蔗糖3%、琼脂0.5%以及不同种类和浓度的激素,PH5.8,培养
温度28±1℃,光强2000Lux,每天光照10—12小时。将前面的材料小块,接种在MS+6-BA3.5mg/L十NAA0.2mg/L的初代培养基上,培养15天后,顶芽开始生长。为减少褐色分泌物的影响,20天后转移到同样的新鲜培养基上,5—7天后肢芽萌动生长。20天后每个外植体可长出3—4个小芽。小芽长至1—2厘米时切成单芽,转入继代培养基MS+6-BA4mg/L十IBA0.3mg/L。30天后形成丛生芽,每丛有6-8个小芽。以后可多次分割继代增殖。将长约2—3厘米的单芽,转人生根培养基1/2MS+NAA2mg/L十0.3%活性碳,15天后即可生根。30天后,组培苗株高7—10厘米,叶片3-5张,叶色浓绿,有粗牡白根4—6条,根长2-5厘米。炼苗一周后可移栽。 移栽和栽培管理:
移栽前3天,打开瓶盖,让组培苗逐渐适应外界气候。小心地把苗从培养瓶中取出,洗
净基部培养基,移栽于塑料筛或沙床中。栽培基质按塘泥、腐殖上、河砂、椰糖(或珍珠岩)2∶1∶1∶1混合配制。掌握移栽深度“深不埋心,浅不露根”,保持空气温度70—80%,移栽成活率达80%以上,小苗移栽成活后即可上盆种植或大田栽植。栀子的大田种植宜选择阳光充足、排水良好、肥沃疏松的砂壤土地块。多施农家肥,防止清水。
第五章 主要设备
设备:(①实验设备;②无菌操作设备;③灭菌设备;④培养设备;⑤接种工具等5个方面。也就
是说,与一般的化学实验室相比,需要加上无菌和组织培专用的设备。)
组培室最基本的实验设备指实验台、晾干架、药品柜、冰箱、烘箱、温箱、搅拌器、离心机、电
炉、蒸馏器、天平、ph计、高压灭菌锅、培养基分装器,以及各种玻璃器皿,如烧杯、培养
皿、三角瓶、量筒、滴管、移液管、定容瓶等。此外,还应当有培养与接种方面的设备与用具,如温湿度调节设备、日光灯、培养架、摇床或转床(供悬浮培养用)、各种类型的培养 箱(可调节温度、湿度、光照等)、各种规格的三角瓶、试管、镊子、剪刀、解剖刀、接种针、酒精灯等。
第六章 资金预算
对年产100万栀子组培苗的工厂化育苗其成本预算、成本构成进行了分析和计算, 总计预算金额:为120万,除了固定的资金外,其余作为流动资金。以下为详细预算表:
建筑预算表:
一楼 建筑预算 二楼 合计 名称 面积(M2) 单价(元) 金额(万元) 展览大厅 100 1000 10 组培总仓库 100 600 6 其他 50 600 3 洗涤及灭菌室 50 1000 5 化学室 80 1000 8 无菌操作室 50 1000 5 缓冲间 20 1000 2 培养室 80 800 6.4 530 45.4 楼内仪器设备药品等预算表:
楼内设备预算 设备名称 数量 高压灭菌器 2 水槽 5 烘箱 1 培养架 6 培养瓶 50000 操作台 3 冰箱 2 PH计 2 试剂柜、药瓶柜及器械柜 3 1000 电子天平 2 0.01 800 分析天平 2 0.0001 3500 蒸馏水制备器 1 20升/时 1000 超净工作台 4 双人单面 115000 恒温培养箱 2 30-100℃ 1500 单价金额(万规格 (元) 元) 400L 3500 0.7 1M2 80 0.04 1000×800×800 3200 0.32 5×2×1.8 800 0.48 1 5 4M2 1000 1.2 1200×1000×1600 4000 0.8 2000 0.4 0.3 0.16 0.75 0.1 4.6 0.3