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凝胶法细菌内毒素检查及干扰综述
作者：王震
来源：《世界家苑·学术》2018年第02期
细菌内毒素是革兰氏阴性细菌的细胞壁组分之一，当细菌死亡或自溶后便会释放出内毒素。凝胶法测定细菌内毒素，作为《中国药典》 的“仲裁”方法，具有简单、经济、快速等特点，已成为细菌内毒素检查的常用方法。但是凝胶法是一种基于鲎试剂中的多个酶蛋白在模拟的生理环境下进行的反应，反应过程中会受到各种干扰因素的影响。 1.凝胶法细菌内毒素的检查 1.1细菌内毒素标准溶液的制备
取标准品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后开启，开启过程中注意防止玻璃碎屑落入瓶内。按照标准品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解内溶物，用封口膜将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后进行稀释，制备成对应浓度的细菌内毒素标准品溶液。 1.2加入样品
取0.1ml/支的鲎试剂8支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后开启，防止玻璃碎屑落入瓶内。八支鲎试剂每两支分为一组，第一组每支加入0.2ml检查用水溶解，作为阴性对照，第二组每支先加入0.1ml检查用水溶解，后加入制备好的标准品溶液0.1ml，作为阳性对照。第三组每支先加入0.1ml检查用水溶解，后加入0.1ml的样品溶液。第四组每支先加入0.1ml的样品溶液，后加入制备好的标准品溶液0.1ml。最后分别轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。 1.3孵育
加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，放入37℃±1℃恒温器中，确保安瓿瓶放入底部，保温60±2分钟。 1.4判断结果
观察并记录结果。将安瓿瓶从恒温器中轻轻取出，避免振动，每管缓缓倒转180°观察，2，4组管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱，为阳性，1，3组未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并能从管壁滑脱，为阴性。表明该样品内毒素合格。 2.凝胶法干扰因素