实验一:洋葱(大蒜)根尖有丝分裂标本的制作与观察
〖实验目的和要求〗
本次实验通过对植物根尖的制片和观察, 要求学生初步学会对植物组织、细胞的固定、离析和压片方法,了解有丝分裂的全过程及其染色体的动态变化情况,掌握有丝分裂各时期的特征。 〖实验原理〗
有丝分裂是细胞均等增殖的过程, 是体细胞分裂的主要方式。在有丝分裂过程中,细胞内每条染色体都能复制一份, 然后分配到子细胞中,因此两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目,形态和性质上均是相同的,在各种生长旺盛的植物组织中均存在着有丝分裂。
分生组织→固定→解离→染色→压片→观察(间期、前期、中期、后期、末期) 〖材料和方法〗
洋葱或大蒜或种子根尖 〖用具和药品〗
水浴锅、显微镜 、恒温箱、剪刀、镊子、单面刀片、载玻片、盖玻片等 卡诺氏固定液、石炭酸品红(或醋酸洋红)染色液、1N盐酸(或0.5%果胶酶+纤维素酶),秋水仙素(0.1%)
〖实验步骤〗
培养→预处理→切取→固定→解离→染色→压片→镜检
1、取材:用水培养大蒜或洋葱,等根尖长到1-2cm,然后用0.1%秋水仙素预处理1-2h,切取(在分裂高峰期)根尖。
2、固定:卡诺氏固定液12-24小时,然后70%的酒精中4℃冰箱保存。
3、解离:从固定液中取出根尖,用蒸馏水洗3次,每次5min,然后用1N盐酸(或0.5%果胶酶+纤维素酶)60℃解离8-10min,再用蒸馏水洗一次。
4、染色:切取乳白色的分生区组织滴一滴石炭酸品红(或醋酸洋红)染色液,染15min。 5、压片,防止气泡产生。
6、镜检。将制片先放在低倍镜视野下,寻找典型的各时期的分裂相细胞,然后转换于高倍镜下仔细观察染色体的形态并描绘下来。 〖注意事项〗
压片时,防止起泡产生,保证细胞呈现单层。 〖作 业〗
1、绘出所观察到有丝分裂个时期的染色体图,并注明时期。 2、预处理与未预处理的分裂相有何不同为什么?
3、在高倍镜下观察统计5个视野内的分裂相细胞填入下表:
视 野 1 2 3 4 5 合 计 占观察总数的% 间期 前期 中期 后期 末期 合计
在观察中所见何种分裂相细胞最少?为什么?