专题三 基因工程与克隆技术
(时间：30分钟)
考点一 基因工程
1．(2014·南通二模)(多选)下列关于生物技术安全性和伦理问题的叙述，正确的是
( )。
A．转基因植物合成的某些蛋白质，可能成为某些人群的过敏原 B．克隆人可能冲击现有的婚姻、家庭和两性关系等传统伦理道德观念 C．如转基因植物的外源基因来源于自然界，则不存在安全性问题 D．运用重组基因技术可以将致病菌或病毒改造成威力巨大的生物武器 解析 转基因植物合成新蛋白质具有异物性，有别于原先存在的蛋白质，对一些过敏体质的人可能会成为新的过敏原，A正确；克隆人严重违反人类伦理道德，包括婚姻、家庭和两性关系等传统方面，B正确；即使转基因植物的外源基因来源于自然界，由于改变了出现的方式、时间、地点等，可能会对生物多样性、生态系统的稳定性等造成影响，C错误；运用重组基因技术对致病菌或病毒进行改造后，增强了这些生物的生存力和侵染力，可变成威力巨大的生物武器，D正确。 答案 ABD
2．(2014·苏锡常镇二模)下图为三种质粒和一个含目的基因的DNA片段示意图。图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因，lacZ为蓝色显色基因，EcoRⅠ(0.7 Kb)、 PvuⅠ(0.8 Kb)等为限制酶及其切割的位点与复制原点的距离，1 kb＝1 000个碱基对长度。请据图回答问题：
(1)质粒A、C不能作为目的基因运载体的理由分别是________________、
______________________________________________________________。 (2)将图中的目的基因与质粒B进行重组，需要用到________________酶。如果是两两重组，可能有________种长度的重组结果。
(3)基因工程中检测筛选含有目的基因的重组质粒是一个重要的步骤。现运用酶切质粒，完全酶切后进行电泳观察，若出现长度为1.1 kb和________kb，或者________kb和________kb的片段，则可以判断该质粒已与目的基因重组成功(重组质粒上目的基因的插入位点与EcoR I的识别位点之间的碱基对忽略不计)。
解析 (1)质粒A缺少标记基因，质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时会破坏复制原点。(2)将目的基因和质粒B进行重组，首先要用限制酶进行切割，再用DNA连接酶连接。由于切割后的质粒与目的基因有相同的黏性末端，两两重组会出现质粒与质粒、目的基因与目的基因、质粒与目的基因3种连接片段。(3)目的基因长4.0 kb，质粒B长2.7 kb，目的基因用EcoR Ⅰ切割会出现两种长度，1.0 kb和3.0 kb，另外在质粒上EcoRⅠ与PvuⅠ的距离为0.1 kb，因此如果用EcoR I切割会出现两种结果，一种是1.0 kb＋0.1 kb的片段，另一种是3.0 kb＋0.1 kb的片段，再根据总长度来计算出剩余片段长度。
答案 1)缺少标记基因 复制原点被限制酶切割 (2)限制酶(PvuⅠ)和DNA连接 3 (3)5.6 3.1 3.6
3．(2014·山东潍坊一模)下图表示转基因烟草的培育过程。请据图回答：
(1)图示过程将外源基因导入受体细胞的方法是______________，若将外源基因导入动物细胞，目前采用最多、最有效的是__________技术。
(2)为便于鉴别受体细胞中是否含有外源基因，携带外源基因的质粒上应有__________，还应有__________，以利于外源基因的表达。
(3)该过程中用到的植物细胞工程技术是____________，这项技术应在________条件下进行，依据的生物学原理是__________________。 (4)外源基因的检测首先要采用DNA分子杂交技术检测_______________，其次采用分子杂交技术检测______________________，最后通过抗原—抗体杂交检测__________________。 答案 (1)农杆菌转化法 显微注射 (2)标记基因 启动子和终止子
(3)植物组织培养 无菌 细胞的全能性
(4)转基因生物的DNA上是否插入了外源基因 外源基因是否转录出了mRNA 外源基因是否翻译成蛋白质 考点二 植物细胞工程
4．(2014·南通三模)下列关于植物组织培养及其应用的叙述，正确的是 ( )。 A．离体的植物组织、器官必须经过灭菌才能接种到组织培养基中 B．生长素、细胞分裂素的协同调节作用在组织培养中非常重要 C．以植物芽尖为材料通过组织培养可以获得植物新品种
D．以人工膜包裹植物愈伤组织和营养物质可制得人工种子
解析 离体的植物组织、器官必须经过消毒后才能接种到组织培养基中，灭菌会影响组织细胞，A错误；生长素、细胞分裂素的比例不同，会导致离体组织向不同方向分化，故两者协同作用非常重要，B正确；以植物芽尖为材料通过组织培养可以获得无病毒植株，遗传物质和原来相同，不属于新品种，C错误；以人工膜包裹植物胚状体或胚芽和营养物质可制得人工种子，D错误。 答案 B
5．(2014·河南豫东、豫北十所名校联考)科学家利用植物体细胞杂交技术成功获得了番茄—马铃薯杂种植株，为了便于杂种细胞的筛选和鉴定，科学家利用红色荧光和绿色荧光分别标记番茄和马铃薯的原生质体膜上的蛋白质，其培育过程如图所示：
(1)植物体细胞杂交依据的生物学原理有___________________________ _____________________________________________________________。 (2)过程①常用的酶是__________，细胞融合完成的标志是_____________。 (3)植物原生质体融合过程常利用化学试剂__________诱导融合，在鉴定杂种原生质体时可用显微镜观察，根据细胞膜表面的荧光的不同可观察到______种不同的原生质体，当观察到____________________时可判断该原生质体是由番茄和马铃薯融合而成的。
(4)过程③和过程④依次为______________，过程④中的培养基常添加的植物激素是________________。
(5)若番茄细胞内有m条染色体，马铃薯细胞中含n条染色体，则“番茄—马铃薯”细胞在有丝分裂后期含______条染色体。若杂种细胞培育成的“番茄
—马铃薯”植株为四倍体，则此杂种植株的花粉经离体培育得到的植株属于________植株。
答案 (1)细胞膜的流动性、植物细胞的全能性 (2)纤维素酶和果胶酶 形成了新的细胞壁 (3)聚乙二醇(或PEG) 3 融合的细胞表面既有红色荧光又有绿色荧光 (4)脱分化和再分化 生长素和细胞分裂素 (5)2(m＋n) 单倍体
考点三 动物细胞工程
6．(2014·南京三模)(多选)下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是 A．动物细胞培养所需的营养物质与植物细胞培养相同 B．传代培养时需要用胰蛋白酶处理贴壁生长的细胞 C．癌细胞在培养瓶中培养不会出现接触抑制现象 D．动物细胞培养时需要添加抗生素以防止杂菌污染
解析 动物细胞培养所需的营养物质与植物细胞培养不同，动物细胞培养中需加入动物血清等，植物细胞培养中需加入植物激素，A错误；传代培养时需用胰蛋白酶将细胞分散，B正确；癌细胞无接触抑制现象，可无限增殖，C正确；动物细胞培养需加入抗生素以免杂菌污染，D正确。 答案 BCD
7．(2014·南通二模)科学家用黑白两种美西螈(两栖动物)做实验，将黑色美西螈胚胎细胞的细胞核移植到白色美西螈的去核卵细胞中，结果发育成的美西螈全部是黑色的。相关叙述错误的是
A．根据实验结果可初步推断动物细胞核控制着生物的遗传
B．选择胚胎细胞作为供核细胞的原因是其分化程度低，易恢复全能性 C．培养植入核的卵细胞时，需保证营养物质的供应并控制好环境条件 D．需对受体美西螈进行同期发情处理，保证移植来的胚胎能顺利存活 解析 细胞核是遗传和代谢的控制中心，A正确；供核细胞决定了重组细胞的分裂分化能力，胚胎细胞的特点符合条件，B正确；细胞培养的条件是成功的关键，C正确；美西螈是两栖动物，属于卵生动物，受精卵直接在体外完成胚胎发育，D错误。 答案 D
8．H7N9禽流感是一种新型禽流感，于2013年3月底在上海和安徽两地率先被
( )。 ( )。