压力逐渐降低到零度后，才能打开锅盖，从锅中取出灭菌物品，放入白瓷盘，存放于培养室待用。培养基灭菌后取出让其凝固，直立放置让其保持平面，有的试管为扩大培养基面积，要求斜放保持鞋面。此时锅及锅内物品都很烫，操作时需戴加厚的棉手套。 注意事项：
1）锅内冷气必须排尽，否则压力表指针虽然达到一定压力，但由于锅内冷空气的存在并达不到应有的温度因而影响灭菌效果：
2）当达到一定压力后，注意在保持压力过程中，严格控制时间，时间过长会使一些化学物质遭到破坏影响培养基成分，时间短则达不到灭菌效果； 3）三角瓶中的液体不超过总体积的70%，否则当温度达到100摄氏度时，培养基会喷溢，造成培养基和包装纸的污染。 2.2.4.2全自动立式高压蒸汽灭菌锅 操作步骤：
1） 检查灭菌锅内的水位，应当浸没加热圈并不要高于套桶底部，若水量不足请加入蒸馏水或去离子水使得加热圈被浸没；若不慎加入过量的水，请使用底下带有绿色扳手的排液阀排出多余的水后使水位合适。灭菌锅在使用以前排液阀必须关闭；
2） 检查左侧下方排气管，使其浸在水盆里，并确保管口一定浸在水面以下； 3）放入要进行高压灭菌的物品，最好将物品放入灭菌金属筐内，再放入灭菌锅内进行灭菌。将顶盖转到灭菌锅正上方并旋紧； 4） 关上安全阀；
5）打开电源，设定温度、时间后并按SET键确认； 6）按START键开始高压灭菌；
7）灭菌结束，灭菌锅开始发出警报声，待温度降低到80°C仔细检查压力表读数是否为零，确认为零则关闭总电源后可以开启顶盖，开启时操作者应头部略微后仰。开盖后可以先让锅内物品稍微冷却后再取出；
8）若由于非常规原因导致灭菌异常终止请使用安全阀放空锅内高压蒸汽，待压力表读数为零后可以打开顶盖。 注意事项：
1）任何时候当压力表显示压力不为零绝对不能打开灭菌锅顶盖；9） 任何时候灭菌前请注意：灭菌锅内的水位是否合适，是否浸没加热圈；顶盖是否已经盖紧；安全阀是否已关闭；左侧下方排气管是否浸在水面以下；
2）长期使用或者受到污染的灭菌锅应当用蒸馏水或去离子水进行清洗，使用底下排液阀将清洗液排出，再加入蒸馏水或去离子水到适当的位置备用； 3）灭菌时至少要留出约占容器1/4体积的空间，这样沸腾的液体就不会溢出； 4）灭菌时要把容器的盖子松开，防止容器内压力过大，致使容器破裂； 5）取出灭好菌的容器前要拧紧容器的盖子，否则与空气接触容器内染菌。 2.3植物无菌材料建立和培养 2..3.1无菌操作技术 2.3.1.1用品
超净工作台、75％的酒精、95％的酒精、盛有培养基的培养瓶、接种器械（主要指 解剖刀、剪刀、镊子等）、酒精灯、培养材料（根、茎、叶或种子等）、0.1％的升汞（或漂白粉）、无菌水等； 2.3.1.2方法步骤
1）在接种前4h用甲醛与高锰酸钾混合薰蒸接种室，并打开紫外灯照射30min；2）正式接种前半小时左右，打开超净工作台上的紫外灯和风机，20～30min后接种；
3）用肥皂水洗净双手，在缓冲间内穿好灭过菌的实验服、帽子与拖鞋，进入接种室；
4）用75％的酒精擦拭工作台面和双手；
5）用蘸有75％酒精的纱布擦拭装有培养基的培养器皿，放进工作台； 6）把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95 ％ 酒 精 中，在 火 焰 上 灭 菌 后 ，放 在器 械 架 上 ；
7）将植物材料进行灭菌消毒处理（见下表）
植物材料 石楠茎段 侧柏种子 75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗2—3次 一组、二组 氯化汞处理8分钟，氯化汞处理10分钟，无菌无菌水冲洗3—4次 水冲洗3—4次 三组、四组 氯化汞处理10分钟，氯化汞处理15分钟，无菌无菌水冲洗3—4次 水冲洗3—4次 8）用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口各部分都烧到，打开封口塑料； 9）取下接种器械，在火焰上灭菌；
10）把培养材料迅速放入培养瓶，扎上瓶口（每人接种5～10瓶）。操作期间应经常用75％酒精擦拭工作台和双手；接种器械应反复在95％的酒精中浸泡和在火焰上灭菌； 11）接种结束后，清理和关闭超净工作台。 3.植物培养材料的观察统计与分析
3.1不同灭菌消毒方法对植物材料消毒的影响统计 表1 材料 石楠茎段 处理 消毒1 消毒2 侧柏种子 消毒3 消毒4 接种瓶数 污染瓶数 污染率 存活数 存活率% 注：消毒1：石楠茎段用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗2—3次；氯化汞处理8分钟，无菌水冲洗3—4次
消毒2：石楠茎段用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗2—3次；氯化汞处理10分钟，无菌水冲洗3—4次
消毒3：侧柏种子用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗2—3次；氯化汞处理10分钟，无菌水冲洗3—4次
消毒4：侧柏种子用75%酒精消毒30秒，无菌水冲洗2—3次；氯化汞处理15分钟，无菌水冲洗3—4次
3.2不同继代培养基对幼茎侧芽萌发的影响
培养基1 培养基2 培养基3 培养基4 平均 重复1 重复2 重复3 重复1 重复2 重复3 重复1 重复2 重复3 重复1 重复2 重复3 表2
3.3植物生长调节物质对植株生根效果影响
吲哚丁酸(mg/l)
4.结果分析与讨论
IBA(mg/l) 接种数 生根率% 生根时间 根数 根长（cm） 根系形态