MTT法原理步骤(4)

2020-11-29 00:48

12、如果不使用96孔板,培养基超过100 ml,MTT按照10%的比例加入。

13、对于DMSO,溶解后呈紫(红)色,490nm有最大吸收值;而对于SDS和酸化异丙醇,则选用570nm,并且建议以655nm作为参考波长。

14、96孔板在培养箱中,由于湿度不够,而培养箱由于具有一定的温度,使得边缘的孔水分蒸发较快,导致培养基中各种成分浓度变化增大,导致细胞状态不同。对于这种现象,要保证培养箱中的湿度,减少开关培养箱的次数和时间。

15、注意细胞悬液一定要混匀,已避免细胞沉淀下来,导致每孔中的细胞数量不等,可以每接几个就要再混匀一下。

16、没有去掉上清直接加DMSO,沉淀会很难溶解。加DMSO前要把液体吸掉,但培养液里的紫色结晶可能会吸去,也可在倒之前先用平板离心机离心96孔板,2000r,5分钟,然后吸掉上清。加入DMSO后可用排枪反复抽吸助溶,溶解后尽快检测。

17、为了减少误差,培养板的四边孔只加培养基或只接种细胞,而不作为指标检测孔。

18、除置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解外,可用枪头吹打,加快溶解,效果亦可;或放入37度放孵箱15分钟溶解结晶。


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