实验一 鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法
禽,可通过鼻孔挤出粘液,或将棉拭子插入鼻裂中取样。
(2)培养基制备:马丁琼脂培养基(本实验中采用该培养基)、5%鸡血清葡萄糖淀粉琼脂、鲜血琼脂培养基。
(3)动物接种:如果病料污染严重,则可将0.2mL碾碎的病料,经皮下或腹腔内接种家兔、小鼠或易感鸡,接种动物在24h~48h内死亡,可以从肝脏、心血中分离到巴氏杆菌。
(4)培养:将病料接种于马丁琼脂培养基在35℃~37℃下培养,经18h~24h培养后菌落直径为1mm~3mm,菌落呈散在、圆形,表面凸起呈奶滴状。
注意:如果病料未污染,(3)、(4)步骤可省略。 ⒌ 病原鉴定
(1)培养特性:为兼性厌气菌,生长最适温度为35℃~37℃,经18h~24h培养后,菌落直径为l mm~3mm,呈散在的圆形凸起和奶油状,有荚膜菌落稍大。
(2)镜检:从菌落上挑取少量涂片,干燥,固定、染色、镜检同上。 (3)生化鉴定:
1.糖发酵试验:取纯培养物分别接种葡萄糖、单奶糖、甘露醇、蔗糖、麦芽糖、乳糖、鼠李糖发酵管,37℃培养2~3d,观察结果。
2.吲哚试验:取纯培养物接种蛋白胨水,37℃培养2~3d,加入吲哚试剂,观察结果。 3.硫化氢试验:取纯培养物接种醋酸铅琼脂,37℃培养18~24h,观察结果。 4.对紫乳作用的观察:取纯培养物接种紫乳培养基,37℃培养2~3d,观察结果。 巴氏杆菌生化试验
注: + 糖发酵试验中表示产酸不产气、其它试验中表示阳性; - 阴性。
⒍ 动物试验
1.取病料制成1:10乳剂,或用细菌的培养液。
2.取0.2~0.5ml皮下注射小白鼠,经24~48h动物死亡。置解剖盘内剖检观察其败血症变化,同时取心血、肝、脾组织涂片,分别进行美蓝染色或瑞氏染色、革兰氏染色,镜检可见大量两极浓染球杆状的巴氏杆菌,革兰氏染色阴性。 7. 结果判定:
依据病原分离培养特性、生化鉴定、动物接种试验可作出确切诊断。 5.教学方式 讲述与实践 6.考核要求
实验报告 7.实验报告要求
⒈ 禽巴氏杆菌病的临诊表现和病理解剖变化? ⒉ 疑似巴氏杆菌病的病鸡,如何进行微生物学诊断?