实验室sop
4.4.4.7细胞培养5天去磁珠,细胞混匀转离心管中,在磁力架上去除磁珠,细胞计数补加培养基,IL-2 100U/ml细胞密度调整至0.6x106/ml继续培养。
4.4.4.8定期观察细胞生长情况,主要观察其形态的变化,数目及增值情况,细胞碎片及杂质情况,每2-3天加液培养。
4.4.4.9根据细胞状态和临床治疗需要,培养9天时细胞数量达到要求,各项检测合格。包括:无菌检测,内毒素检测,细胞活力,细胞表型等。
4.4.5 Car-T细胞收集:
4.4.5.1确认细胞各项检测己符合要求。
4.4.5.2根据治疗方案(一般一个疗程分多次回输,间隔时间为1天),取出相应细胞悬液,剩余细胞补加培养基继续培养,供再次回输。
4.4.5.3细胞悬液转入离心管中,300g离心5min。
4.4.5.4除去上清培养液,加PBS缓冲液稀释混匀,300g离心5min,弃上清,PBS缓冲液300g/min离心5min。
4.4.5.5细胞装袋(一般静脉回输,采用100ml双阀盐水袋),离心完成后取上清,做无菌检测,20ml生理盐水重悬细胞,100μm细胞滤网过滤,取少量细胞悬液进行细胞数量,细胞活率,革兰氏检测,内毒素检测。
细胞过滤完成,转入100ml盐水袋中,加5%注射用人血白蛋白,贴上标签,并填写相关记录。
4.5细胞运输与保存:
4.5.1核对细胞标签内容,填写回输发放记录。
4.5.2细胞盐水袋放置于运输容器内(一般为疫苗箱,4度),填写交接记录表。
4.5.3运输人员在运输过程中避免距离震荡,并在规定时间内送到。
4.5.4细胞运输保存温度保持在4度左右,并在规定时间内回输,如果患者不能按时回输,请及时联系实验技术人员,返回实验室。