GUS组织化学染色

GUS组织化学染色

GUS组织化学染色

1. 实验原理

适宜的反应条件下，β-葡聚糖苷酶（GUS）可将X-Gluc水解成蓝色物质，因此具有GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点，可用肉眼或显微镜观察到。

2． 实验材料

1） 转基因烟草叶片或试管苗

2） 非转基因烟草的叶片或试管苗（阴性对照）

3． 药品试剂

1) X-Gluc，用N-N-二甲基酰胺配成20mM的贮存液，分装成每管100µL，保存于-20℃。

2) 底物溶液（染色液）：

3) 1mM X-Gluc加入100mM磷酸钠缓冲液（pH=7.0）,缓冲液中含10mM EDTA-Na2，1-5mM K3[Fe(CN)6](铁氰化钾)，1-5mM K4[Fe(CN)6](亚铁氰化钾)，0.001%（V/V）Triton X-100

4． 实验器材

小药瓶，培养皿，培养箱（37℃），微量移液器

5． 实验步骤

1) 将准备好的叶片放入小药瓶，加入染色液浸没试材，封好盖子；

2) 37℃培养箱中温育1小时至过夜；

3) 将浸染过的试材转入70%或95%乙醇中脱色2-3次（除去叶绿素），至阴性对照材料呈白色为止。

6． 结果

叶片上GUS活性的部位或位点呈现蓝色或蓝色斑点。

先用DMSO溶解X-GLUC 好像是100mg/2ml PBF 94ML+X-GLUC 0.1ML+TRITION X-100 2ML +FE2+ 2ML+ FE3+ 2ML

Gus staining

1. Excise root and leaf segments, wash with 100mM potassium

phosphate buffer (pH7.0) for 3 times.