干细胞可以同宿主内细胞团细胞共同发育，分化成成体动物的各种组织（包括生殖细胞），形成嵌合体。
a.转基因胚胎干细胞的获得 b.囊胚注射
c.嵌合体的检测和育种
5.转基因动物的鉴定方法有哪些？ a.标记筛选法利用正负筛选标记
b.分子鉴定法：PCR扩增、斑点杂交、Southern杂交、荧光原位杂交 c.表达水平检测：报告基因检测、 Northern杂交、 RT-PCR、聚丙烯酰胺凝胶电泳、 Western杂交、目的蛋白的生物活性检测
判定是否产生出转基因动物的重要标准是检查外源基因是否整合到动物的生殖系统中，即是否能够稳定遗传。
第十五章酵母基因工程
2.作为一个酵母表达载体，包括那些基本元件？
典型的酵母表达载体均为大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒。 ·原核部分：大肠杆菌中ori和抗生素抗性序列。
·酵母部分：维持复制的元件，如附加型的2μm质粒复制起点序列，或染色体的自主复制序列（auto-replication sequence, ARS），或整合型载体的整合介导区；酵母转化子的筛选组分以及编码特定蛋白的基因启动子和终止子序列。 ·分泌型表达载体还要带有信号肽序列 酵母表达载体主要元件 ①启动子
最常用的启动子是基因AOX1的启动子，在它控制下的外源基因在甲醇诱导时能得到高效表达。
PGAP（三磷酸甘油醛脱氢酶启动子）：在毕赤酵母中克隆到的一个组成型启动子，在它控制下的β-LacZ基因表达率比甲醇诱导下的以PAOX1启动的产量更高。
PGAP不需要甲醇诱导，发酵工艺更为简单，又因其产量很高，所以成为代替PAOX1的最具潜力的启动子。 ②选择标记
常用HIS4，以及ARG4、TRP1或URA3作选择标记的载体。 巴斯德毕赤酵母不能利用蔗糖，所以可用来源于酿酒酵母的蔗糖酶基因SUC2作为选择标记。 抗性选择标记有抗生素G418抗性基因和Zeocin抗性基因（一种强诱变剂）。 leu-作为酵母载体的选择标记基因 ③信号肽序列
表达外源蛋白分胞内表达和分泌表达。
毕赤酵母本身基本不分泌内源蛋白，所以外源蛋白的分泌需要具有引导分泌的信号序列。 如果自身信号肽序列效果不佳，可用α-交配因子引导序列引导外源蛋白的分泌。在巴斯德毕赤酵母载体中还使用过蔗糖酶基因 SUC2的信号肽序列、酸性磷酸酶基因PHO1的信号肽序列等。 ···3.叙述附加型表达载体和整合型表达载体用在表达外源基因上的区别。 ···4.如何提高基因在染色体上的拷贝数来提高异源基因的表达量？
附
什么是蓝白斑筛选法？ 答：这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌β-半乳糖苷酶（lac）的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac-宿主菌后，在含有X-gal平板上形成浅蓝色的菌落或噬菌斑。外源基因插入lac（或lac基因部分被取代）后，重组的菌体或噬菌斑将丧失分解的能力，转入lac-宿主菌，在含有X-gal平板上形成白色的菌落或噬菌斑，非重组的菌落或噬菌斑则为蓝色。