1.量取下列试剂，置于10mL塑料离心管中。 1M Tris-HCl 1.25mL
SDS（ 十二烷基硫酸钠 ） 0.5g BPB（溴酚蓝） 25mg 甘油 2.5mL
2.加入去离子水溶解后定容至5mL。 3.小份（500μl/份）分装后，于室温保存。 4.使用前将25μl的2-ME加到每小份中。
5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右
16S 核糖体RNA
1.简介
16S 核糖体RNA（16S ribosomal RNA，或简称为 16S rRNA）是[1] 分。16S rRNA的长度约为1,542 nt。一个细菌的细胞中可包含多种具有不同序列的16S rRNA
已知16S rRNA具有如下几项功能：
16S rRNA具有与原核生物核糖体大亚基中的23S rRNA相似的结构决定功能，可作为核糖体蛋白质结合的架构。在足量Mg2+存在下分离到的16S rRNA处于紧密状态，其空间结构与30S 亚基的大小和形状十分相似。
16S rRNA的3'端含有能与mRNA上游AUG起始密码子通过氢键结合的反夏因-达尔加诺序列。另有发现表明，16S rRNA中1,505－1,539的CCUCC序列与mRNA的相应序列有互补关系。
16S rRNA能通过氢键与23S rRNA结合，增强原核生物70S 核糖体一大一小两个亚基（50S 亚基与30S 亚基）结合时的稳定性。
16S rRNA能通过其1,492及1,493的腺嘌呤残基（参见嘌呤分子结构图解）的N1原子与mRNA骨架上的2'OH基团之间产生氢键，使核糖体A位密码子－反密码子的碱基互补配对稳定化。 2.通用前体
由于不同种的真细菌与古细菌间的16S rRNA基因（16S rDNA）是高度保守
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的，16S rDNA常被用于对各种生物进行的系统发育学方面的研究这种运用16S rRNA对生物进行系统发育学研究的方法由卡尔·沃斯（Carl Woese）开创。另外，线粒体和叶绿体中的rRNA也都被扩增了。 在获得能提供系统发育学信息的16S rRNA分子时需要利用通用PCR引物对16S rRNA分子进行扩增。 16S rRNA序列的对比分析需要在这类“通用引物”的脱氧核糖核酸分子的辅助下完成，这类分子具有如下序列：
8UA正向：5'-AGA GTT TGA TCM TGG CTC AG-3' 519B反向：5’-GTA TTA CCG CGG CKG CTG-3' 反向：ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT
这类引物因并未在近期发现的几种属于纳古菌门（Nanoarchaeota）的热液古菌中分离识别出来，也被称为准通用引物。 3.进化指征
在众多的生物大分子中，最适合于提示各类生物亲缘关系的是rRNA,尤其是16S rRNA被普遍认为是一把好的谱系的“分子尺”这是因为：
（1） rRNA参与生物蛋白质的合成过程，其功能是任何生物都必不可少的，而且在生物进化的漫长经历中其可能保持不变。
（2）在16S rRNA分子中，既含有高度保守的序列区域又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物。
（3） 16S rRNA相对分子质量大小适中，便于分析。在5S rRNA、23S rRNA和16S rRNA三种分子中，5S rRNA包含120个核苷酸，虽然它也可以作为一种信息分子加以利用，但由于其信息量小应用上受到限制。23S rRNA蕴含着大量的信息，但序列测量和分析比较的工作量较大。而16S rRNA相对分子质量大小适中（约含1540个核苷酸）含有比较广泛的的生物信息量，加上rRNA在细胞中含量大（约占细胞中RNA的90%）也易于提取。
4. 16S rRNA普遍存着于真核生物和原核生物中，真核生物中其同源分子是18S rRNA。
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