计数框内应无气泡，也不应有样品溢出。
▲ 计数时显微镜的目镜可用
10倍的，物镜用40倍的，但根据情况（如大小）可
加以变动。
▲ 为减少工作量，一般不对整个计数框内水样中的浮游植物都计数，而只选取其
中一部分水样计数。
▲ 选取过程是一个次级抽样过程，故要考虑到抽样的大小和代表性，可有三种方
法。
（1）计数框行格法
?
对计数框上的第二、五、八行三行共30个小方格进行计数 （标本较密时）或全片计数（标本较稀时）
（2）目镜视野法
? 利用显微镜的目镜视野来选取计数的面积。先用台微尺量得在一定放大倍数下的
视野直径，然后按圆面积计算公式（r2）求得视野面积。或者由所用目镜的视场直径值除以物镜放大率求得视野直径。
? 为使选取的视野在计数框上有均匀的分布，可利用计数框上的方格或者显微镜的
机械移动台上的标尺刻度。
计数的视野数目应根据样品中浮游植物数量的多少确定。 每片大约计算50～100个视野，但视野数可按浮游植物的多少而酌情增减。一般原则： （3）目镜行格法
?
计数时注意事项
1） 采用上述某种计数方法后，不要随意改变，以保证结果的可比性；
2） 如遇到一个浮游植物个体或细胞的一部分在行格或视野内，另一部分在行格或
视野外，可按：在 行格上线或视野上半圈的个体或细胞不加计数，而在下线或下半圈的则计数；
3） 在报告结果和分析时应说明表示的单位、采用的方法、优势种类等； 如果要求计算精度高，则对量小而个体大的种类应另外用低倍全片计数，
特别是当需要精确地计算生物量时，更应当如此；
4）计数的单位可以用个体或用细胞表示。用个体数表示，计数时较省力，但由
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于藻类的个体有的是串细胞的，有的是由数目相差悬殊的细胞组成的群体，因此用个体数表示不及用细胞数表示精确。当用细胞数表示时，在计数时可采用几种方法： ① 对丝状、群体种类，可先计算个体数，然后求出该种类的个体的平均细胞数，进行换算；
② 在计数过程中计算细胞数；
③ 对形成“水华”的优势种类，如微囊藻，计数前可用加碱、加热、用力摇散
等方法使之散开为单个细胞或少数细胞的群体；
5） 计数前应先对样品作定性观察，以热悉主要种类及其形态特点；
6） 计数时应把注意力集中于主要种类，对数量极少的稀见种类，一时确定不了
归属的，可先计数，需要时再鉴定种类；
7） 每一计数样品应取样和计数两次，两次结果与平均数之差应不大于土15％，
否则须继续取样计数。 2、计算结果
把计数所得结果换算为原来所采的水样中浮游植物的数量时用下列计算公式 : A Vs N = — × — n Ac Va
按上述方法，A为20×20=400毫米2，Vs为30毫升，Va为0.1毫升。因此，如计数的行格或视野的面积确定，就可求出一常数K=（A／Ac）×（Vs／Va）。 每次计数后只须把所得n值乘以K值，就得到原来水样中每升的藻类量，例如： ▲ 当用计数框行格法，计数3行格时， K＝（400／120）×（30／0.1）=1 000
▲ 当用目镜视野法时，如视野面积为0.093毫米2 ，计数100个视野，则K
值为12 900；计数200个视 野，K值为6 450，其余类推。 第五节 生物测试 一、生物测试（Bioassay）的定义和意义
指系统地利用生物在各级水平上的反应测定一种或多种污染物，在环境因素单独或联合存在时，所导致的影响或危害（各级水平包括：分子、细胞、组织、器官、
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个体、种群－生态系统）。 ▲ 生物测试主要回答以下问题：
在何种浓度下危害生物或使生物致死 对生物的影响过程及机理 污染物 对哪类生物最敏感 对生物的联合效应
对生物的影响与各种因素的关系
▲ 意义：
监测和评价环境质量变化 确定单一污染物的安全浓度
制定污染物或工业废水排放标准、环境质量标准 解决环境纠纷
污染物的生态风险评价等。 二、生物测试的方式 （一）生物测试的分类
短期：藻类<72h，水蚤类<48h，鱼类<96h 根椐时间 中期：8天—90天 长期：整个生活史 毒性试验 积累试验 根据效应 行为试验
三致试验（致癌、致崎、致突变）、DNA损伤试验
静止式生物测试
流动式生物测试。
▲ 短期的生物测试
● 生物在短时间内暴露于高浓度的污染物下，测定污染物对生物机体的影响。主
要用于测定半数致死浓度（LC50）或半数抑制浓度（IC50）或半数效应浓度（EC50）。
● 根据所用测试生物（受试生物）物种的不同，其测试时间也不同。水污染的短
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期生物测试中，
一般来说，藻类 < 72 h，水蚤类 < 48 h、鱼类 < 96 h，其最长不超过8 d。
● 短期生物测试大多数采用静止式。
● 一般来说，短期生物测试对于快速估计污染物的毒性、评定几种不同的毒物或
废物对某种生物的相对毒性或评定不同生物对不同的条件如温度、pH的相对敏感性等，具有实用价值。 ▲ 中期生物测试
是介于短期和长期之间的一类生物测试。在短期与中期或在中期与长期之间，没有严格的区分。一般来说，8d之内算做短期，8 d到90 d的算做中期。 中期的试验可以是静止式和流动式，但在大多数情况下采用流动式。 ▲ 长期生物测试
是指在低浓度污染物作用下，暴露时间要尽可能长达受试生物的整个生活史的一类生物测试。对更小的生物（如浮游生物）则可持续好几代。但有些生物的生活史很长，甚至长达数年，可选用在整个生活史中的最敏感几个阶段来进行。 长期的生物测试只能采用流动式。 （二）受试生物的选择
1．受试生物对试验的污染物或因子具有敏感性 2．受试生物具有广泛的分布和足够的数量 3．受试生物是生态系统的重要组成部分 4．受试生物在实验室内易于培养和繁殖
5．受试生物的反应能够被测定并有一套标准的方法 6．对受试生物的生物学背景资料有充分的了解 三、生物测试的标准化
受试生物、实验条件及实验室（人员、仪器等） 四 、生物测试的类型 （一）毒性试验
▲ 几个基本概念
毒物 —— 在一定条件下，以较小剂量给予机体时，能与生物相互作用，引起生
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物体功能或器质性损伤的化学物质
或剂量虽微，但累积到一定的量，就能干扰或破坏机体的正常生理功能，引起暂时或持久性的病理变化，甚至危及生命的化合物，亦称毒物。
中毒 —— 生物体受到毒物作用引起功能或器质性改变后出现的疾病状态称中毒。 毒性 —— 是指有毒物质接触或进入机体后，引起生物体的易感部位产生有害作用的能力。
▲ 生物测试或毒性试验中常用的一些参数：
? 致死剂量（LD）或致死浓度（LC）：
一次染毒后引起受试生物死亡的剂量或浓度。 ? 绝对致死剂量（LD100）或浓度（LC100）：
引起受试生物全部死亡的最低剂量或浓度。 ? 半数致死剂量（LD50）或浓度（LC50）：
引起受试生物的50﹪死亡最低剂量或浓度。 ? 半数效应浓度（EC50）：
引起50﹪受试生物的某种非死亡效应的浓度。 ? 半数抑制浓度（IC50）：
引起受试生物的某种效应50﹪抑制的浓度。
?
最小致死剂量或浓度（MLC）
能使一群动物中仅有个别死亡的最高剂量或浓度。
?
最大耐受剂量或浓度（LC0）
能使一群动物虽然发生严重中毒，但全部存活无一死亡的最高剂量或浓度。
?
最大无作用剂量
当外来化学物的剂量减到一定量但尚未到零时，生物学变化已达到零，即不能再观察到外来化学物所引起的生物学变化，此剂量即为最大无作用剂量。 最大无作用剂量是评定外来化合物毒性作用的主要依据，并可以其为基础，制订人体每日容许摄入量和最高容许浓度
?
最小有作用剂量
是指能使机体发生某种异常变化所需的最小剂量，即能使机体出现毒性反应的
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