对翻译水平影响较大，通常ATG的context与kozak的consensus sequence越接近，蛋白表达越好，所以优化kozak序列对于哺乳动物细胞表达是非常重要的。
构建GFP（绿色荧光蛋白）的融合基因要自带KOZAK序列和ATG
Kozak序列
(2009-03-05 20:27:45) 转载
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标签： 分类： 分子生物学 教育
在真核起始过程中，由Met-tRNAi，eIF-2和GTP形成了三元复合体（ternary complex）再结合40S小亚基形成前起始复合物(preinitiation complex)。此复合物的形成分为二步：首先GTP和eIF-2结合，以增加此因子与Met-tRNA．结合的效率。然后三元复合体再与40S亚基结合。核糖体结合位点由起始密码子所决定，在某些起始密码子上游邻接序列也可能十分重要，被称为Kozak序列(ACCAUGG)，它相当于原核的S-D序列。前起始复合物结合5′7meG帽结构并沿着mRNA扫描，借助Kozak序列搜寻第一个起始密码子。 Kozak规则是基于已知数据的统计结果,所谓Kozak规则,即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律.
若将第一个ATG中的碱基A,T,G分别标为1,2,3位,则Kozak规则可描述如下: (1)第4位的偏好碱基为G;
(2)ATG的5'端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T; (3)在-3,-6和-9位置,G是偏好碱基;
(4)除-3,-6和-9位,在整个侧翼序列区,C是偏好碱基
真核引物设计需在ATG前加上GCCACC
? 不论全长还是部分，在做真核表达时，一般都要带上kozak序列，用部分cDNA时，还要加上ATG。
多加一些上游序列对你有利，因为一些上游序列自带KOZAK序列；或其他促进表达的序列。.有利于引物设计，因为从ATG开始设计引物，不是每个基因都可以的。引物扩增时头几个容易错，在上游序序
列就没关系了。
? 加Kozark sequence(GCCACC),kozak sequence是用来增强真核基因的翻译效率的。是最优化的
ATG环境，避免ribosome出现leaky scan。
要做基因的真核表达，其实关键的是要在起始密码子附近设计一个Kozak序列：GCCGCCA/GCCAUGG
Kozak序列是位于真核生物mRNA 5’端帽子结构后面的一段核酸序列，通常是ACCACCATGG，它可以与翻译起始因子结合而介导含有5’帽子结构的mRNA翻译起始。对应于原核生物的SD序列。
人类起始密码子周围的序列 kozak序列： Kozak consensus sequence, Kozak consensusor Kozak sequence 存在于真核生物mRNA的一段序列，其在翻译的起始中有重要作用。
核糖体能够识别mRNA上的这段序列，并把它作为翻译起始位点。注意这段序列并不是ribosomal binding site (RBS)核糖体结合位点，而是帽子结构。
真核生物基因中起始密码子上下游的最佳序列为，-3位为嘌呤碱基；+4位为G，起始密码子AUG中的A处于+1位。A/GCCAUGG被称为kozak序列或扫描序列。
KOZAK是一个女科学家，她研究过起始密码子AUG周边碱基定点突变后对转录和翻
译所造成的影响，并总结出在真核生物中，起始密码子两端序列为：—— G/N-C/N-C/N-ANNAUGG——，如GCCACCAUGG、GCCAUGAUGG时，转录和翻译效率最高，特别是-3位的A对翻译效率非常重要。该序列被后人称为Kozak序列，并被应用于表达载体的构建中。
所谓Kozak规则，即第一个AUG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律，若将第一个AUG中的碱基A，U，G分别标为1，2，3位，则Kozak规则可描述如下：
(1)第4位的偏好碱基为G；
(2)AUG的5’端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T； (3)在-3，-6和-9位置，G是偏好碱基；
(4)除-3，-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。
Kozak规则是基于已知数据的统计结果，不见得必须全部满足，一般来说，满足前两项即可。
真核引物设计需在AUG前加上GCCACC
不论全长还是部分，在做真核表达时，一般都要带上kozak序列，用部分cDNA时，还要加上AUG。多加一些上游序列对你有利，因为一些上游序列自带KOZAK序列；或其他促进表达的序列。.有利于引物设计，因为从AUG开始设计引物，不是每个基因都可以的。引物扩增时头几个容易错，在上游序序列就没关系了。
加Kozark sequence(GCCACC)是用来增强真核基因的翻译效率的。是最优化的AUG环境，避免ribosome（核糖体）出现leaky scan