原代培养和传代培养技术
?贴壁培养技术
?贴壁培养是指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。大多数动物细胞在离体培养条件下都需要
附着在带有适量正电荷的固体或半固体表面才能正常生长，并最终在附着表面扩展成单层。 ?细胞系:
?从广义上讲，原代培养物经首次传代后，能在体外继续生长繁殖的细胞即为细胞系。根据细胞分裂能力，可分为有限细胞系和无限细胞系两类。
?一般认为，如果细胞能在体外培养生长超过50代，培养时间超过1年，而且细胞的倍增时间保持稳定时，就可以认为建系成功。
6 组织工程
?组织工程是应用细胞生物学和工程学原理，将人体某些部分的组织细胞种植和吸附在一
种生物材料的支架上进行人工培养、繁殖、扩增，然后移植到人体内所需要的部位，从而达到器官修复或再造的治疗目的的一种技术。 ?组织培养
?（1）上皮组织的体外培养?
（2）肌肉组织的体外培养
?(3) 神经组织的体外培养
8 器官培养
基本技术要点是：取出动物器官或进一步修整成器官型植块，将其接种到培养基上或培养液中，在适当的营养、气相、生长基质等条件下使其存活和生长。
8 干细胞
不同的干细胞具有不同的分化潜能。从所具有的分化功能上讲，干细胞可分为单能干细胞、多能干细胞和全能干细胞。?（2）干细胞来源
?从来源上讲，干细胞包括成体干细胞和胚胎干细胞。
胚胎干细胞：胚胎干细胞简称为ES细胞，是一种全能干细胞，它是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞系，可以分化成任何一种组织类型的细胞。
?干细胞培养与诱导分化的意义 ?（1） 组织或器官修复 （2）基因治疗
第10章 胚胎工程
?10.1 胚胎工程 ?10.1.1 定义
?以体外受精和体外早期胚胎发育为基础，目前已经发展了卵子切割、性别控制、嵌合体
制作、细胞核移植、转基因操作等定向控制、改造和创造新遗传性状的技术。由于这些技术都是在胚胎发育过程中进行的，因此把这些技术统称为胚胎工程（embryo technology）。
?对动物实施胚胎工程的意义： ?（1）发挥优良母畜的繁殖潜力
（2） 促进家畜改良的速度 3）作为胚胎操作的基础 （4）保存遗传资源
?10.2 胚胎工程的技术方法 ?胚胎工程采用的技术主要包括：
?体外受精、胚胎移植、胚胎分割与融合、胚胎性别鉴定、胚胎冷冻和基因导入等。其中体外受精、
胚胎移植是胚胎工程的核心技术。?10.2.1 体外受精 ?（1）精子的采集与体外获能处理 ?（2）卵子的回收与成熟培养
（3）体外受精受精卵的发育与体外培养 ?10.2.2 胚胎移植
?胚胎移植是动物胚胎工程的一项关系技术。胚胎移植又称为受精卵移植，是指一头母畜（供体）发情排卵并经过配种后，在一定时间内从其生殖道（输卵管或子宫角）取出受精卵或胚胎，或者体外培养受精卵发育到囊胚期，然后把它们移植到另外一头与供体同时发情排卵、但未经配种的母畜（受体）的相应部分（输卵管或子宫角）。这个来自供体的胚胎能够在受体的子宫着床，并继续生长和发育，最后产下供体的后代。即借腹怀胎。 (1)超数排卵（2）发情同步化（3）人工授精和胚胎的采集、鉴别
（4）胚胎移植
?10.2.3 胚胎分割
?胚胎分割主要是借助显微操作技术或徒手操作方法，切割早期胚胎成2、4等多等份，再
移植给受体动物，从而制造同卵多仔后代的技术。 ?10.2.4 胚胎融合
?胚胎融合又称胚胎嵌合，是将两枚或两枚以上的胚胎（同种或异种动物）的部分或全部细胞融合在一起，使之发育成一个胚胎，然后移植到受体内让其继续发育形成一种嵌合体后代的技术。
?10.2.5 动物性别控制与胚胎性别鉴定
?所谓性别控制，就是通过人为干预或操作手段使动物繁殖所需要的后代。
?动物性别控制是一项显著提高经济效益的工程技术。家畜性别控制主要有两条途径，一是X和Y精子的分离，二是胚胎性别鉴定。 胚胎冷冻保存技术 ?10.3 试管动物
?10.3.1 定义
?将供体的精子和卵子在体外受精、体外培养胚胎，然后将发育到一定程度的胚胎移植入受体，所
获得的动物称为试管动物。由于体外受精一般都是在试管中进行的，因此称之为试管动物。 ?试管动物的培育技术主要包括以下几个技术环节：精子的采集与体外获能处理、卵子的
回收与成熟培养、卵子与精子的体外受精、受精卵的体外发育、试管胚胎的移植。 ?10.3.3 试管婴儿 ?（1）定义
?试管婴儿是指分别将卵子和精子取出后，在体外使其受精，并发育成胚胎后，再植回母体子宫内发育、出生的婴儿。 ?技术步骤
?主要技术环节包括：超排卵、取卵、取精、体外受精、受精卵体外培养、胚胎移植、子宫内发育。
第十一章 细胞重组与克隆技术
?11.1 细胞重组
?细胞重组是指从活细胞中分离出细胞器及其组分，然后在体外一定条件下将不同来源的
细胞器及其组分进行重组，使其重新装配成为具有生物活性的细胞或细胞器的一种实验技术。
?11.1.1 细胞重组的特点与意义
?11.1.2 细胞重组技术
?细胞重组的方式基本可分为以下三种： ?1）胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种。
?2）微细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体。 ?3）胞质体与核体重新组合形成重组细胞。
?胞质体：是除去细胞核后由膜包裹的无核细胞。
?微细胞：又称微核体，是指含有一条或几条染色体（即只含一部分基因组），外有一薄层
细胞质和一个完整质膜的核质体。
?11.2 克隆技术 ?11.2.1 克隆的定义
?克隆本意是指遗传上完全相同的分子、细胞或来自同一祖先的生物个体的无性繁殖群体。 ?克隆是指一种实现无性繁殖的操作。 ?11.2 .2 克隆的技术方法 ?（1）细胞核移植
?1）定义：细胞核移植技术是一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的
去核成熟卵内的精细技术。细胞核移植所得到的杂种称为核质杂种。细胞核移植技术是克隆技术的关键。
?（2）核移植技术
?细胞核移植的前提：尽量使核供体和受体细胞处于同样的细胞周期。 ?1）供体和受体的准备
2）去卵膜和卵核3）供体细胞制备4）移核 ?（3）克隆动物一般制备技术
（4）体细胞克隆技术
?以克隆羊多莉的制备过程为例，详细介绍体细胞克隆动物的技术。 克隆技术的应用与意义
?克隆技术的发展，特别是体细胞克隆技术的重大突破，无疑是生物技术发展史上的一个里程碑。它克服动物种间杂交障碍，创造出新的物种，培育良种。能加快珍稀动物繁殖，抢救濒危动物（如大熊猫）。建立重要疾病的基因模型，生产生物活性药物。为了解细胞发育的潜能性、细胞核和细胞质间的相互关系、胚胎发生死亡及其调控研究提供了新视角，对揭示生命科学重大基础问题具有重要的科学价值。