实验九 微生物细胞大小测定
实验九 微生物细胞大小测定
一、目的要求
1、学习掌握微生物的显微测量方法 2、增强微生物细胞大小的感性认识
二、实验原理
微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下测量。测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确等分的刻度，有把5毫米刻成为50等分(或把10毫米长度刻成100毫米)，镜台测微尺为一专用的载玻片，上面贴有一圆形盖片，中央具有刻度，长度1mm，等分为100小格，每格长0.01mm(10um)。
目镜测微尺每格所实际代表的长度随使用的目镜和物镜的放大倍数而改变，所以使用前必须用镜台测微尺进行校正，以求得在一定放大倍数下每格实际测量的长度。
三、实验器材
1、仪器 显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺或血球计数板 2、材料 自分离菌株
四、操作步骤
1、目镜测微尺的校正 把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，将镜台测微尺放在载物台上，刻度面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，并使两尺左边的一条线重合，向右寻找另一条两尺重合的直线。 2、目镜测微尺校正计算
按上述方法分别测量低倍镜、高倍镜及油镜下目镜测微尺与镜台测微尺相应的格数，并重复3次，分别计算平均值后再按以下公式计算出低倍镜、高倍镜及油镜下，目镜测微尺每格表示的实际长度：
目镜测微尺每格（um）=
3、菌体大小的测量
大肠杆菌先进行涂片、干燥、固定、结晶紫染色2分钟，洗净染料，干燥后，测量细胞的长、宽的格数，再乘目镜测微尺每格的长度，得细胞实际的长宽，测量细胞个数20个。
4、细胞群体大小的表示
当表示测量的细胞的群体大小时的表示方法常用测量值的幅度表示，如若测定的菌为球体时，将测量之最小值置于前面，后加一表示幅度的短线“—”，在短线之后是测量的最大值。若非球形，则将细胞宽的测量的幅度与长的幅度分别在其最小值与最大值之间加短线“—”，并在中间加“×”，如2.5—4.0×7.5-9。亦有用平均数等表示。 五、注意事项
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两条重合线间镜台测微尺的平均格数?10
两条重合线间目镜测微尺的平均格数实验九 微生物细胞大小测定
当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 六、实验报告
1．目镜测微尺标定结果：
低倍镜下 4 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 低倍镜下 10 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 高倍镜下 40 倍目镜测微尺每格长度是 μm。 2．菌体大小测定结果：
菌体编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 长(?m) 宽(?m) 菌体大小(平均目镜测微尺格数 菌体长度 目镜测微尺格数 菌体宽度 值)长×宽(?m)
七、问题和思考
1．为什么更换不同放大倍数的目镜和物镜时必须重新用镜台测微尺对目镜微尺进行标定？
2．若目镜不变，目镜测微尺也不变，只改变物镜，那么目镜测微尺每格所测量的镜台上的菌体细胞的实际长度（或宽度）是否相同？为什么？
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实验九 微生物细胞大小测定
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