实验一 高效液相色谱柱效能的评定
1. 实验目的和要求
1.1了解高效液相色谱仪的基本结构。 1.2初步掌握高效液相色谱仪的基本操作方法。
1.3 学习高效液相色谱柱效能的评定及分离度的测定方法。
2. 实验原理
苯、甲苯分子非极性部分的总表面积不同，缔合能力不同，其保留时间也不同。通过计算色谱峰的理论塔板数以及各个化学物质间的分离度评价色谱柱的效能。
3. 实验仪器与试剂
3.1 仪器
高效液相色谱仪（带自动进样器，或配置微量进样器） 分析天平 3.2 试剂
苯、甲苯（均为分析纯） 甲醇（色谱纯） 高纯水
4. 实验步骤
4.1 色谱条件
色谱柱：C18，4.6×150mm，5μm 流动相：甲醇-水（80：20，v/v） 流速：1mL·min-1 检测波长：254nm 柱温：30℃ 进样量：20μL 4.2 操作步骤
? 精密配制含苯、甲苯贮备液；
? 分别精密吸取贮备液制备成混合溶液。按照上述色谱条件操作，进样，
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记录色谱图。
? 计算各色谱峰的理论塔板数及各峰间分离度。 4.3 实验数据处理
? 记录实验条件，测试各试样后记录苯、甲苯的保留时间、峰宽、半峰宽，
计算出各物质对应的理论塔板数。根据保留时间与峰宽信息，计算相邻物质对间的分离度。
组分 试验号 1 苯 2 平均 1 甲苯 2 平均 tR（min） W（min） W1/2（min） n（塔板·m-1） ? 柱效计算
n?16(tR2t)?5.54(R)2WW12式中：tR为峰值保留时间（min），W1/2为半峰宽（min），W为峰宽（min）
? 分离度计算
K?tR1?tR22(t?t)?R1R2(W1?W2)/2W1?W2式中：tR1和tR2分别为相邻两组分的峰值保留时间（min）
W1和W2分别为相邻两组分色谱峰的峰宽（min）
5. 问题与讨论
5.1 如何用实验方法判别混合液色谱图上苯、甲苯的色谱峰归属？ 5.2 如何改变色谱条件，可以减小苯、甲苯的保留时间？
5.3 若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改变实验条件以获得改善？
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