TCID50可用Reed-Muench法、内插法、或Karber
1、Reed-Muench法
将病毒液在灭菌小试管内作连续的10倍稀释,即用1ml吸管吸取0.2ml病毒液,加入已装有1.8ml的hanks液或earle液的第一支小试管内,将混合液充分振荡,并另换1支新的1ml吸管,吹打混合后,吸取0.2ml移入第二管1.8ml的hanks液管中,更换吸管,如上充分振荡和吹打混匀后,再吸取0.2ml移于第三管。连续如此操作,即可作成连续的一系列10×稀释液。吸取每一稀释度的病毒液0.1ml,加入于小试管内已长成单层的敏感细胞培养物中,每个稀释度的病毒液接种4-10个细胞管。于37℃旋转或静置培养,逐日观察（一般需7-10天左右）,直至终点,也就是看到能够引起病毒增殖（根据细胞病变或血凝素测定等）的病毒最高稀释度。按表14-2所举例子（每个病毒稀释液接种8个细胞管）计算TCID50 表14-2 TCID50的测定和计算（Reed-Muench法） 病毒液稀释度 10 10 10 10 10 10 -6-5-4-3-2-1细胞管观察结果 出现CPE管 不出现CPE管 8 8 7 3 1 0 0 0 1 5 7 8 累计细胞官数 出现CPE管 不出现CPE管 27 19 11 4 1 0 0 0 1 6 13 21 细胞管总数 27 19 12 10 14 21 出现CPE的细胞管所占的％ 100（27/27） 100(19/19) 91.6(11/12) 40(4/10) 0.7(1/14) 0(0/21) 出现细胞病变（CPE）以及血凝素等的细胞管数分别列于表14-2的第二和第三列,它们的累计数分别列于第四和第五列（根据箭头所示方向）,第六列为细胞管总数,第七列为出现细胞病变的细胞管数占细胞管总数的百分率。可见该病毒株的TCID50在10-3（91.6％）和10-4（40％）之间,其确切稀释倍数可按下列公式计算：
91.6（高于50％的百分数）-50 91.6（高于50％的百分数）-40（低于50％的百分数） ＝41.6/51.6＝0.8
将由上式获得0.8加在高于50%死亡的稀释度的对数（3）上,因此该病毒的TCID50应是0.1ml 10-3.8稀释的病毒液。查反对数得6310,即该病毒6310倍稀释液0.1ml等于1个TCID50。
2、内插法
在计算出表14-2第七列,即出现细胞病变的细胞管数的基础上,也可按内插法计算：
91.6（高于50％的百分数）-40（低于50％的百分数） 50（半数量的比率）-40（低于50％的百分数）
＝（相应的病毒液稀释度的对数）-（-4）（40％相应的病毒液稀释度的对数）/TCID50的对数-（-4）（40％相应的病毒液稀释度的对数）
解上式得TCID50的对数为0.8,结果与Reed-Muench
3、Karber法
按表14-3及5 Karber公式计算TCID50效价： 表14-3TCID50的测定和计算（Karber） 病毒液稀释度 出现CPE的细胞管（阳性管）的比率 10-1 8/8＝1 10-2 8/8＝1 10-3 7/8＝0.875 10-4 3/8＝0.375 10-5 1/8＝0.125 10-6 0/8＝0 Karber公式为：lgTCID50＝L-d（s-0.5）其中L＝最高稀释度的对数；d＝稀释对数之间的差；s＝阳性管比率总和。
所以, lgTCID50＝-1-1（3.375-0.5）＝-3.875 故TCID50效价＝10
3.875
计算结果与Reed-Muench法近似。
应用组织培养细胞进行感染力测定,较实验动物的LD50测定简便的多。如果采用微量培养板培养细胞进行此项实验,更能大量节省人、物力。