- 6 - 菊花花瓣组织培养
图3-5 完整植株（1） 图3-6 完整植株（2）
3.1.1 讨论
实验过程中部分愈伤组织、幼苗出现不同程度的褐化现象（如图3-2、图3－4），即
由于组织中多酚氧化酶被激活，使细胞中的代谢发生变化，酚类化合物被氧化后产生醌类化合物，这类物质是终身的，会逐步扩散到培养基中，抑制其他酶的活性，毒害整个外植体组织，导致组织代谢紊乱，生长受阻，最终逐渐死亡。结合实验实际情况，分析褐化现象可能是以下的几个方面造成的：
i.
实验中制备外植体，采用多枚菊花花瓣，这些花瓣由里至外生长状态不同。一
[4]
般菊花的老化程度越高，其木质素的含量也越高，也就越容易褐变，成龄材料一般均比幼龄材料褐变严重ii.
[4~5]
，因此接种后部分试管中出现程度不同的褐变。
在实验途中有几支试管倾倒在日光灯管上，可能造成温度升高。 高温促进酚
氧化，培养温度越高，褐变越严重。 iii.
从实验时间及其他小组情况来看，可能是菊花的培养时间过长造成。材料培养
时间过长，会引起褐变物的积累，加重对培养材料的伤害。菊花随着培养时间的延长，褐变程度会加剧，甚至在超过一定时间不进行转接，褐变物的积累还会引起培养材料的死亡。
改善褐化的方法：根据光照对褐化的影响原理，可以在采取菊花前，将接种后的初代培养的菊花在黑暗条件下培养，对抑制褐变发生也有一定的效果。遮光抑制褐变的原因主要是由于氧化过程中，许多反应受酶系统控制，而酶系统活性受光照影响
[4~5]
[4]
。
- 7 - 菊花花瓣组织培养
但是，暗培养时间过长会降低外植体的生活能力，甚至引起死亡。因此要注意控制暗培养时间。 4．参考文献：
[1] 李名扬等. 菊花花瓣愈伤组织原生质体培养再生植株 .农业生物技术学报（第4卷
第3期）1996.9
[2] 刘晓晴﹒生物技术综合实验﹒北京科学出版社，2009 43~44 [3] 梁红﹒生物技术综合实验教程﹒北京：化学工业出版社，2010 24~31 [4] 陈菲，李黎，宫伟﹒植物组织培养的防褐化探讨﹒北方园艺，2005 [5] 王康才.张雪琼.茅毓英杭菊花花瓣组织培养.中草药2000.9 8~10