流加葡萄糖的速度根据pH、溶O2或CO2释放率予以调节
? 注意事项
? 培养基中无机盐包括S、P、Mg、K、Fe等，但Fe对生产菌有
一定毒性，浓度必须在30μg/ml以下
? 前体物质浓度>0.19%时对细胞和合成有毒性，需低浓度流加，
一次加入量低于0.1%，保持供应速率略大于生物合成的需要
? 菌丝浓度：在稳定期，湿重15-20%，干重3-5%，过高，供养不
足
? 消泡剂：加入方式是少量多次，前期不宜多加
? 过程控制十分精细，一般2h取样一次，测pH，菌浓、残糖、残
氮、前体物质浓度、效价、无菌检查
四、青霉素的提炼工艺
青霉素不稳定，发酵液预处理、提取和精制过程要条件温和、快速，防止降
解
? 预处理与过滤：
? 目的：浓缩青霉素，去除大部分杂质
? 醪液组成：菌体、残留的营养物质、杂质、色素、青霉素（4%）、
金属离子、其他代谢物质等等
? 步骤：
? a.降温至10℃以下，
? b.鼓式真空过滤机过滤，除去菌丝体和大部分蛋白（滤
液pH6.2-7.2，蛋白0.05-0.2%）
? c.用10%硫酸调pH4.5-5.0，加絮凝剂，助滤剂，过板
框。等滤液澄清透明
? 萃取：溶媒萃取法
? 目的：提纯浓缩
? 原理：青霉素游离酸易溶于有机溶剂，而青霉素盐易溶于水 ? 步骤：
? 酸化pH2.0-3.0，加1/3 BA（醋酸丁酯），加0.05-0.1%
的乳化剂，混合均匀，分离得一次BA萃取液；（去除蛋白质）
? 加1/3 NaHCO3缓冲液萃取，pH7.0-8.0。从BA液中萃
取到缓冲液中；
? 重复一次得二次BA萃取液（可以再重复一次）
? 注意：整个过程在10℃以下进行，总收率约85%
? 脱色：活性炭脱色
? 目的：除去色素、热原 ? 步骤：
? 在BA液中加活性炭，除去色素、热原， ? 过滤，除去活性炭
26
? 结晶：用丁醇共沸结晶法
? 目的：得到青霉素钾（钠）盐产品
? 原理：青霉素钾（钠）盐在乙酸丁酯（butyl acetate）中溶解度
很小
? 步骤：
? 向BA萃取液中加入乙酸钾－乙醇溶液，钾盐直接析出 ? 过滤，钾盐溶于0.5mol/L KOH溶液，调pH6.4～6.8 ? 加3～4倍体积的丁醇，在16-26℃，0.67-1.3kPa下真
空蒸馏。水与丁醇以共沸物形式蒸出，得青霉素钾盐结晶
? 将晶体洗涤后干燥即为成品
27