DNA聚合酶与Klenow酶的区别是DNA聚合酶有5'-3'外切活性而Klenow酶无。DNA聚合酶利具有5'-3'外切核酸酶活性，可用切口平移法标记DNA。但Klenow酶因为没有5'-3'外切核酸酶活性是其利用范围进一步扩大。例如：补平DNA的3＇凹端，抹平DNA的3＇凸端，通过置换反应对DNA进行末端标记，随机引物标记等。
3.答：DNA聚合酶（DNA polymerase）的主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP等的情况下）及其相辅的活性。 DNA聚合酶的共同特点是：
（1）需要提供合成模板；（2）不能起始新的DNA链，必须要有引物提供3'－OH；（3）合成的方向都是5'→3'（4）除聚合DNA外还有其它功能。
所有原核和真核的DNA聚合酶都具有相同的合成活性，都可以在3'－OH上加核苷酸使链延伸，其速率为1000 Nt/min。加什么核苷酸是根据和模板链上的碱基互补的原则而定的。
其中真核细胞有四种DNA聚合酶：
DNA聚合酶α位于细胞核内，有催化细胞增生的作用； DNA聚合酶β位于细胞核内，有修复DNA的作用；
DNA聚合酶γ位于线粒体内，是线粒体DNA合成酶和具有3＇→5＇外切酶活性。DNA聚合酶δ位于细胞核内，有持续合成DNA链的能力和3＇→5＇外切酶活性，是 完成复制的主要酶；DNA聚合酶ε位于细胞核内，参与DNA的修复合成和具有3＇→5＇外切酶活性。
原核细胞有三种DNA聚合酶：
DNA聚合酶Ⅰ具有切除引物与修复DNA功能和3＇→5＇外切酶活性与5＇→3＇外切酶活性，用于切口平移法中标记DNA、cDNA克隆中的第二链合成和对3＇-突出末端的DNA作末端标记；
DNA聚合酶Ⅱ具有修复DNA功能和3＇→5＇外切酶活性； DNA聚合酶Ⅲ是DNA复制酶和具有3＇→5＇外切酶活性。 用途：（1） 缺口平移法制作标记DNA，可用作杂交探针；
（2） 合成cDNA的第二链，即单纯的DNA聚合活性； （3） 填补双链DNA3?凹端； （4） DNA序列分析 3. 答：（1）、常用的工具酶
① 限制性核酸内切酶：是细菌产生的一类能识别和切割双链DNA分子内特定的碱基顺序的核酸水解酶。
② DNA连接酶：将两段DNA分子拼接起来的酶。 ③ DNA聚合酶：催化单核苷酸链延伸。
④ 逆转录酶：依赖于RNA的DNA聚合酶，这是一种有效的转录RNA 成为DNA的酶，产物DNA又称互补DNA。
⑤ 末端脱氧核糖核酸转移酶：将脱氧核糖核酸加到DNA的3＇末端。 ⑥ 碱性磷酸酶：催化去除DNA、RNA等的5＇磷酸基团。 ⑦ 依赖DNA的RNA聚合酶：识别特异性启动子，RNA转录。 （2）、良好载体的条件 ①必须有自身的复制子；
②载体分子上必须有限制性核酸内切酶的酶切位点，即多克隆位点，以供外源DNA插入；
③载体应具有可供选择的遗传标志，以区别阳性重组子和阴性重组子； ④载体分子必须有足够的容量； ⑤可通过特定的方法导入细胞；
⑥对于表达载体还应具备与宿主细胞相适应的启动子、前导顺序、增强子、加尾信号等DNA调控元件。