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答案:(1)肠蛋白酶 1.5左右
(2)①温度 酶活性/催化效率/反应速率 有 ②活细胞 专一性 ③降低化学反应的活化能
④否 据图可知酶活性随温度提高逐步升高,酶活性峰值未出现
15.萌发的小麦种子中有α淀粉酶和β淀粉酶。α淀粉酶较耐热,但在pH为3.6下可迅速失活,而β淀粉酶不耐热,在70 ℃条件下15 min后失活。
实验材料和用具:萌发的小麦种子、麦芽糖标准液、5%淀粉溶液、斐林试剂、蒸馏水、水浴锅等。 实验步骤:
一:制作麦芽糖梯度液。取7支干净的试管,编号,按表加入试剂后60 ℃水浴加热2 min。 试剂 麦芽糖标准液/mL 蒸馏水/mL 斐林试剂/mL 试管号 1 0 2.0 2.0 2 0.2 1.8 2.0 3 0.6 1.4 2.0 4 1.0 1.0 2.0 5 1.4 X 2.0 6 1.6 Y 2.0 7 2.0 Z 2.0 二:用萌发的小麦种子制备淀粉酶溶液。
三:将装有淀粉酶溶液的试管70 ℃水浴15 min后迅速冷却。
四:另取4支试管,编号A、B、C、D,向A、B试管中各加5 mL 5%淀粉溶液,向C、D试管中各加2 mL已经处理的酶溶液(忽略其中含有的少量麦芽糖)和蒸馏水,将4支试管40 ℃水浴10 min。将C、D试管中的溶液分别加入到A、B试管中,摇匀后继续40 ℃水浴10 min。
五:取A、B试管中反应溶液各2 mL分别加入E、F试管,然后向E、F试管分别加入 ,并进行 ,观察颜色变化。
结果分析:将E试管中颜色与步骤一中获得的麦芽糖标准液进行比较,获得该试管中麦芽糖浓度,并计算出α淀粉酶催化效率。请分析回答:
(1)本实验的目的是测定小麦种子中 。
(2)步骤一的5~7试管中加入蒸馏水的量(X、Y、Z)分别是 、 、 (单位mL)。
(3)实验中F试管所起的具体作用是检测实验使用的淀粉溶液中 。 (4)若要测定另一种淀粉酶的活性,则需在第 步骤进行改变。
解析:步骤一:由表中数据可知,蒸馏水+麦芽糖标准溶液=2 mL,所以表中X、Y、Z的值为0.6、0.4、0。
步骤二、三:本题实验的目的是测定40 ℃条件下α淀粉酶的催化效率,可用萌发的小麦种子制取α淀粉酶溶液,但萌发的小麦种子也含有β淀粉酶,所以需除去β淀粉酶以防止干扰实验结果。因为α淀粉酶在pH 3.6以下迅速失活,但耐热,β淀粉酶不耐热,在70 ℃条件下15 min后就失活,所以将制备的淀粉酶溶液置于70 ℃恒温箱中15 min,取出后迅速冷却即可获得α淀粉酶溶液(若要测定β淀粉酶的活性,则需将制备的淀粉酶溶液置于pH低于3.6溶液中,获得β淀粉酶溶液)。 步骤四、五:反应结束后,需用斐林试剂进行鉴定,使用斐林试剂时需要在60 ℃水浴中加热3 min后,再观察颜色变化。结果分析:最后将E试管中的颜色与1~7号试管进行比较,获得该试管中麦芽糖浓度,并计算出α淀粉酶的催化效率的平均值。
实验中F试管是对照组,作用是排除淀粉酶溶液中还原糖对实验结果的干扰从而对结果进行校对。 若要测定β淀粉酶的活性,则需要对步骤三进行改变,具体的操作是将淀粉酶溶液置于pH低于3.6溶液中一段时间从而获得β淀粉酶。
答案:2 mL斐林试剂 60 ℃水浴加热2 min后 (1)α淀粉酶催化效率 (2)0.6 0.4 0
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(3)是否存在还原糖 (4)三
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