2.追加研究
当非临床研究的结果不一致，和/或临床研究结果与非临床研究结果不一致时，可通过回顾性评价和追加研究进行分析。此种情况下，追加的研究结果可能成为综合风险评估的重要组成部分。
追加的研究是为了更深入地了解或提供更多的关于受试物潜在的延迟人心室复极化和延长QT间期的作用。这些研究可以提供更多有关作用强度、作用机制、剂量反应曲线的斜率或最大反应幅度的信息。追加的研究可以针对某一特殊问题设计试验，因此各种体外或体内的研究设计都可应用。
在选择和设计追加研究中，以下内容需与已有的非临床和临床信息一并考虑：
·用离体心脏测量记录动作电位以评价心室肌复极化； ·在麻醉动物用一些能反映动作电位时程的特殊电生理参数； ·动物的种类和性别的选择； ·用代谢诱导剂或抑制剂； ·用目前已知阳性对照物或参比物； ·未研究的对其他通道的抑制作用； ·多时间点测定电生理参数；
·在清醒动物难以解释的作用，如受试物对心率、自主神经紧张的影
响，或受试物的毒性，如震颤、抽搐或呕吐；
·如药物有蓄积、临床长期使用，需考虑多次给药的观察。
四、结果分析与评价
综合风险评估应该是基于科学的、对受试物个性化的考虑。这种综合风险性评估有益于临床研究设计和其结果的分析。应结合药效学、毒理学、
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药代动力学以及其他研究资料进行综合评价，为药物应用于人体的安全性提出建议。
风险评估应考虑受试物是否在化学结构或药理分类上属于可延长人QT间期作用的药物，如某些抗精神病类药物、组胺H1受体拮抗剂、氟喹诺酮类等。这可能会影响参比物的选择并会纳入综合风险评估中。
对QT间期影响的非临床研究策略如下图
五、参考文献
1.ICH, ICH Guidance for Industry ICH S7A：Safety Pharmacology Studies for Human Pharmaceuticals, 2001.
2.ICH, ICH Guidance for Industry ICH S7B：Safety Pharmacology Studies for assessing the potential for delayed ventricular repolarization （QT interval prolongation）by Human Pharmaceuticals, 2005.
3.Liu T, Brown BS, Wu Y, Antzelevitch C, Kowey PR, Yan GX.Blinded validation of the isolated arterially perfused rabbit ventricular wedge in preclinical assessment of drug-induced proarrhythmias, Heart Rhythm 2006; 3: 948-956. — 94 —
体外IKr及体外IKr及多多种离子种离 整体QT整体分析QT 分析 化学/药理分类 追加研究 综合风险性评估 风险评估 相关非临床/临床研究六、附录—试验方法 （一）体外试验
评价药物对离子电流的影响，主要包括IKr和其他几种参与心肌电活动的重要离子通道。体外IKr试验是采用原代心肌细胞或表达IKr通道蛋白（如由hERG编码的蛋白）的细胞系评价药物对离子电流的影响。相关研究方法见参考文献。检测中获得IC50的基本参数项目列于表2。
表1 致心律失常作用试验检测的心肌离子通道 通道种类 阳性对照（参考） 参考文献 Shen J et al Comparison of L-type calcium channel blockade by nifedipine and/or cadmium in guinea pig ventricular myocytes JPET, 2000；294:562–70 Zahradn?k I, Minarovic, I and Zahradn?kova A Inhibition of the cardiac L-typec calcium channel currentby antidepressant drugs JPET,2008；324:977–84 Cav1.2 (L-type) 尼非地平(Nifedipine) hERG Helliwell R, Recording hERG potassium currents and assessing the effects of compounds using the whole-cell patch-clamp technique Jonathan D Lippiat (ed ), Methods in Molecular Biology, Potassium 西沙必利Channels, 2008；491: 279–95 (Cisapride)或特非Kamiya K et al Molecular 那定(Terfenadine) determinants of hERG channel block by terfenadine and cisapride J Pharmacol Sci,2008；108:301-7 Gintant GA et al Utility of hERG assays as surrogate markers of delayed cardiac repolarization and QT safety ToxicolPathol, 2006；34:81-90 De Biasi M et al Open channel block 4-氨基吡啶of human heart hKv1 5 by the (4-Aminopyridine，beta-subunit hKv beta 1 2 Am J 4-AP) Physiol 1997 272: H2932-41 Lagrutta A et al Novel, potent inhibitors
Kv1.5
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of human Kv1 5 K+ channels and ultrarapidly activating delayed rectifier potassium current JPET,2006;317:1054-63 Radicke S et al Effects of MiRP1 and DPP6 β-subunits on the blockade induced by flecainide of KV4 3/KchIP2 channels Br J Pharmacol 2008, 154: 氟卡尼(又名哌氟774–86 酰胺，Flecainide) Fischer F et al Inhibition of cardiac Kv1 5 and Kv4 3 potassium channels by 或4-AP the class Ia anti-arrhythmic ajmaline: mode of action Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2013, online, Jul Kv4.3 Yang WP et al KvLQT1, a voltage-gated potassium channel responsible forhuman cardiac arrhythmias PNAS, 1997; 94:4017- 二乙酰醇293B 4021 KvLQT1/minK (Chromanol-293B) Seebohm G et al Molecular determinants of KCNQ1 channel block by a benzodiazepine Mol Pharmacol, 2003, 64:70-7 Wu L et al Role of late sodium current in modulating the proarrhythmic and antiarrhythmic effects of quinidine Heart Rhythm, 2008；5: 1726-34 McNulty, MM andHanck ,DA State-dependent mibefradil block of Na+ channels Mol Pharmacol, 2004； 66:1652-61 Nav1.5 利多卡因(Lidocaine) Kir2.1 Rodriguez-Menchaca AA et al , The molecular basis of chloroquine block of the inward rectifier Kir2 1 channel 钡(Barium)或氯喹PNAS, 2008；105:1364-8 Schram G et al Barium block of Kir2 (Chloroquine) and human cardiac inward rectifier currents:evidence for subunit-heteromeric contribution to native currents Cardiovasc Res, 2003, 59: 328-38 观察记录上述所有离子通道的相关试验建议在GLP实验室进行
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表2 检测阻断离子通道IC50所需的参数项目 参数项目 试验平台 所需浓度 每一浓度下重复试验例数 阳性对照 溶媒对照 检测温度 浓度范围 试验方案和报告 累积曲线 分析样品收集 PDF格式的电子文档 （二）整体研究
整体QT研究主要是测定心室复极参数，如QT间期。该试验可在安全药理学研究中同时进行，这样可减少动物和其他资源的使用。
QT间期和心率是相反的、非线性的关系，且二者之间的关系在不同的种属和动物甚至同一种属之间都不相同。因此心率改变会影响QT间期，这会干扰对受试物影响心室复极化和QT间期的评价。故在QT间期分析时，应采用心率校正QT间期（QTc）来进行，常用的有Bazett和Fridericia法；心率校正公式的选择须根据试验系统得来的数据加以判断，如果给药组和对照组心率差异较大，可能校正公式对于评价QT间期延长风险是无
IC50 手动膜片钳记录系统 4种 n=3 n=2 1个浓度，n=3 室温 (RT)或生理性温度 (PT) 通过预实验确定 GLP格式 + + + — 97 —