Agilent1100高压液相色谱仪维护保养知识 保养事项:
1、色谱柱长时间不用,存放时,柱内应充满溶剂,两端封死(如 ACN 适于反相色谱柱, 正相色谱柱用相应的
有机相
2、对于手动进样器,当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口,同时搬动进样阀数次,每次 数毫升。
3、流动相使用前必须过滤,不要使用多日存放的蒸馏水(易长菌 。
4、带 seal-wash 的 1100,要配制 90%水 +10%异丙醇,以每分 2— 3滴的速度虹吸排出,溶 剂不能干涸。
5、其它主意事项见说明书,或由现场工程师介绍。 维护知识问答
1、为什么溶剂和样品要过滤 ?
溶剂和样品过滤非常重要, 它会对色谱柱、 仪器起到保护作用, 消除由于污染对分析结 果的影响。
色谱柱:由于填料颗粒很细, 色谱柱内腔很小, 溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细 管容易堵塞。
仪器:溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损, 同时也会增加泵头内的蓝宝石 活塞杆和活塞的磨损。
样品过滤头的类型:
30mm内径:适用于大进样量的过滤,由 0.2μm 和 0.45μm 两种规格 , 材料有纤维素 , 醋 酸纤维 , 聚四氟乙烯。处理样品体积少于 50μl 。
13mm 内径:适用于范围广的过滤,由 0.2μm 和 0.45μm 两种规格 , 材料为纤维素。
3mm 内径:适用于小进样量的过滤, 由 0.2μm 和 0.45μm 两种规格。 处理样品体积为 7μl 。
滤膜类型:
聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐,并无任何可溶物。
醋酸纤维滤膜:不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶液,推荐用于蛋白质和其相关样品。 尼龙 66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可用于强酸, 70%乙醇、二氯甲烷、不适 用于二甲基甲酰胺。
再生纤维素滤膜:具有蛋白吸收低,同样适用水溶性样品和有机溶剂。 2、为什么 HPLC 用缓冲盐时要加在线 Seal-wash 选项?
HPLC用缓冲盐时 , 由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象 , 析出的细小盐粒非常坚 硬 , 它附着在蓝宝石活塞杆上 , 随着蓝宝石活塞杆的往复运动 , 容易产生划痕 , 并磨损密封垫 ,
造成漏液等故障现象。 在线 Seal-wash 选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。 缓冲盐的 浓度在 0.1mol 或大于 0.1mol 时 , 必须使用该在线冲洗选项 .
清洗液配制 :
90%水 +10%异丙醇 . 该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力。以 2-3滴 /min的速度虹 吸流下,不能干涸。
3、为什么 Agilent 1100LC的流动相管路非常细 ?
在使用 HPLC 时 , 应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响, 由于样品分子在液体流动 相中的扩散系数比在气体中小 4~5个数量级,液体流动相的流速也比气相慢 1-2个数量级。 因此,样品进入色谱柱后,在柱子以外的任何死体积(进样器、柱接头、连接管、检测器 中,样品分子的扩散和滞留,都会引起色谱峰的展宽,而使柱效降低。 为使柱外效应减之最 小,获得理想的分析结果, Agilent
1100LC 使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。 毛细管线分类:0.17mm 内径 ------绿色 ;0.12mm内径 -------红色。 PEEK 管线:内径 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。 毛细管线优点 : 柔韧性好 .
***Agilent 公司同时备有 1/16in 的粗外径毛细管线 , 适用于不同习惯的用户 ,优点是刚 性好 , 但柔韧性差一些。
4、流动相使用前为什么要脱气?
流动相使用前必须进行脱气处理 ,以除去其中溶解的气体(如 O2,以防止在洗脱过 程中当流动相由色谱柱流至检测器时, 因压力降低而产生气泡。 气泡会增加基线的噪音, 造 成灵敏度下降, 甚至无法分析。 溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化, 柱中固定相发 生降解而改变柱的分离性能。若用 FLD ,可能会造成荧光猝灭。
常用的脱气方法比较:
氦气脱气法:利用液体中氦气的溶解度比空气低, 连续吹氦脱气, 效果较好, 但成本高。 加热回流法:效果较好,但操作复杂,且有毒性挥发污染。
抽真空脱气法:易抽走有机相。
超声脱气法:流动相放在超声波容器中,用超声波振荡 10-15min ,此法效果最差。
在线真空脱气法:Agilent1100LC 真空脱机利用膜渗透技术,
在线脱气,智能控制,无需额外操作,成本低,脱气效果明显优于以上几种方法,并适用于 多元溶剂体系。
5、如何防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞,以及堵塞后的处理?
溶剂的质量或污染以及藻类的生长会堵塞溶剂过滤器, 从而影响泵的运行, 尤其水溶液 或磷酸盐缓冲液(PH=4— 7。以下几种方法可以有效防止溶剂瓶内溶剂过滤器的堵塞。
A :请严格执行溶剂过滤。
B :请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液
C :如果应用许可,可在溶剂中加入 0.0001---0.001M 的叠氮化钠 . D:在溶剂瓶内溶剂的上方小流量连续吹氩气 , 以隔绝空气。
E:避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下, 尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。
堵塞后的处理法方法:将过滤头从组件中取下,在浓硝酸(35%中浸泡 1h ,然后用二次蒸 馏水冲洗干净并超声处理。
6、 Agilent 1100LC泵如何维护?
Agilent 1100LC泵给色谱柱提供稳定、无脉动、流量准确的流动相,及时合理的维护 非常重要。
A :流动相使用前请必须脱气、过滤。
B :使用缓冲盐时,要加在线 Seal-wash 选项。
C :关机前,用 100%的水冲洗系统 20分钟,然后用有机溶剂冲洗系统 10分钟(如甲醇, 然后关泵,(适于反相色谱柱。 [正相色谱柱用适当的溶剂冲洗 ]
D :及时更换 Purge Valve 内的过滤芯。(当打开 PurgeValve 时,压力高于 10bar ,表明过 滤芯已堵。 E :使用合适的密封圈。
7、如何选择合适的泵头活塞密封圈?
泵头活塞的标准密封圈能适合于大多数应用, 但使用正相溶剂 (如正己烷, 不适合使 用标准活塞密封圈, 特别是长时间使用时, 需更换另一种不同的密封圈, 我们建议使用聚四 氟乙烯密封圈。(p/n0905-14202/pk
***注意:聚四氟乙烯密封圈的压力范围为:0— 200bar ;建议在泵的压力限制中,将最大压 力设为 200bar 。
8、使用梯度比例发时要注意那些事项?
当盐溶液与有机溶剂溶液混合时, 盐溶液能与有机溶剂溶液完全混溶, 而不会出现沉淀。 但是在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,阀 A 接水相 /盐溶液, D 接有 机溶剂,此法连接可有效使盐回落到盐溶液中,并被溶解。若颠倒过来,盐可能落在有机溶 剂中,出现问题。
强烈建议:当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时, 推荐将缓冲盐通道接在 A 通道上, 有机溶 剂通道直接接在 A 通道的上方 D 通道上; 定期用水冲洗所有的通道, 以除去阀口上可能出现 的盐沉淀。
9、在线真空脱气机使用要注意那些事项?
一般来说, Agilent 1100LC 的真空脱气机无需过多维护,只需注意几个注意事项就可 以了。