提高柱效
改善检测器的灵敏度
? 进样系统:
进样系统是将被分离的样品导入色谱柱的装置。要求密封性、重复性好,死体积小,便于实现自动化。
进样系统包括取样、进样两个功能,而实现这两个功能又分为手动和自动两种方式: ? 自动进样器是由计算机自动控制定量阀,按预先编制注射样品的操作程序工作。取样、进样、复位、样品管路清洗等步骤全部按预先设定程序自动进行,一次可进行几十个或上百个样品的分析。
? 自动进样的样品量可连续调节,进样重复性高,适合作大量样品分析,节省人力,可实现自动化操作。
(三)分离系统
? 色谱柱: 色谱柱是高效液相色谱仪的核心部件,要求分离度要高、柱容量大、分析速度快。分离系统的主要元件是色谱柱,它是色谱分离过程中存放固定相的场所。 (四)检测器
? 检测器是HPLC仪的三大关键部件之一。其作用是把洗脱液中组分的量转变为电信号。并由工作站(或记录仪)绘出谱图来进行定性、定量分析。
? HPLC的检测器要求灵敏度高、噪音低(即对温度、流量等外界变化不敏感)、线性范围宽、重复性好和适用范围广。 ? (五)馏分收集器
? 如果所进行的色谱分离不是为了纯粹的色谱分析,而是为了获得少量试验样品的小型制备,馏分收集是必要的。使用馏分收集器比较理想,因为便于用微处理机控制,按预先规定好的程序,或按时间,或按色谱峰起落信号逐一收集和重复多次收集。 (六)色谱数据工作站
? 目前市场上销售的高效液相色谱仪基本上都用微机控制,配备了色谱数据工作站。色谱仪的自动化控制包括自动进样系统的进样方式、输液泵系统中的溶剂流速、梯度洗脱程序、检测系统的各项参数、数据记录和处理等。
6、蒸发光散射检测器(ELSD)的工作原理是什么? ?(1)工作原理
?经色谱柱分离的组分随流动相进入检测器,经历三个步骤:雾化[雾化器中,被高速的载气流(氮气或空气)喷成一种薄雾]——溶剂蒸发[这些雾粒进入可以控制温度的蒸发器
(漂移管)中,使流动相气化蒸发(溶剂蒸发),而剩下的不挥发组分成为微小的雾状颗粒(溶质气溶胶)]——光束检测[溶质气溶胶高速通过光源光路,使光线散射,被位于入射光束120°角处的光电管或光电倍增管收集得到样品信号。]
7、写出基本色谱分离方程式,并说明分离度与n、α、k和关系。
? 分离度(R)受柱效(n)、选择因子(α)和容量因子(k)三个参数的控制:
2、影响分离度的因素?(1)分离度与柱效的关系:?由分离方程式看出,具有一定相对保留值α的物质对,分离度直接和有效塔板数有关,说明有效塔板数能正确地代表柱效能。当固定相确定,被分离物质对的α确定后,分离度将取决于n。这时,对于一定理论板高的柱子,分离度的平方与柱长成正比,即:R12n1L1()??R2n2L2说明用柱长的色谱柱可以提高分离度,但延长了分析时间。因此,提高分离度的好方法是制备出一根性能优良的柱子,通过降低板高,以提高分离度。 (2)分离度与选择因子的关系:
? 由基本色谱方程式判断,当 α= 1时,R = 0。这时,无论怎样提高柱效也无法使两组分分离。显然,α大,选择性好。研究证明α的微小变化,就能引起分离度的显著变化。一般通过改变固定相和流动相的性质和组成或降低柱温,可有效增大α值。
?(3)分离度与容量因子的关系:?看出:当k>10时,随容量因?如果设子增大,分离度的增长是微乎其微的。一般取k为2-10最宜。?对于GC,通过提高温度,可选择合适的k值,以改进分离度。?而对于LC,只要改变流动相的组成,就能有效地控制k 值。它对LC的分离能起到立竿见影的效果。Q?n??1()4?kR?Q()1?k ?(4)分离度与分析时间的关系:?由图tr/Q对k的曲线可见,当k在2~5时,可在较短的分析时间,取得良好的分离度。 8、傅里叶变换红外光谱仪包括哪些主要部件?各部件的作用是什么?
9、区别荧光、磷光、瑞利光和拉曼光,如何减少散射光对荧光测定的干扰?
荧光:是某些物质吸收一定的紫外光或可见光后,基态分子跃迁到激发单线态的各个不同能级,然后经过振动弛豫回到第一激发态的最低振动能级,在发射光子后,分子跃迁回基态的各个不同振动能级。这时分子发射的光称为荧光。荧光的波长比原来照射的紫外光的波长更长。 磷光:是有些物质的激发分子通过振动弛豫下降到第一激发态的最低振动能层后,经过体系间跨越至激发三重态的高振动能层上,再通过振动弛豫降至三重态的最低振动能层,然后发出光辐射跃迁至基态的各个振动能层.这种光辐射称为磷光。磷光的波长比荧光更长。
瑞利光:光子和物质分子发生弹性碰撞时.不发生能量的交换,仅是光子运动的方向发生改变,这种散射光叫做瑞利光,其波长和入射光相同。 拉曼光:光子和物质分子发生非弹性碰撞时,在光子运动方向发生改变的同时,光子与物质分子发生能量交换,使光于能量发生改变。当光子将部分能量转给物质分子时,光子能量减少,波长比入射光更长;当光子从物质分子得到能量时,光子能量增加,波氏比入射光为短。这两种光均称为拉曼光。 为了消除瑞利光散射的影响,荧光的测量通常在与激发光成直角的方向上进行,并通过调节荧光计的狭缝宽度来消除 为消除拉曼光的影响可选择适当的溶剂和选用合适的激发光波长
10、电子跃迁有哪几种为型?跃迁所需的能量大小顺序如何?哪几种跃迁在紫外-可见光谱上可以反映出来?
E(δ→δ*)>E(n→δ*)>E(π→π*)> E(n→π*)
π-π*跃迁 可以反映