33． 为什么大多数核酸酶受金属螯合剂EDTA的抑制？
34． 对一双链DNA而言，若一条链中（A+G）/（T+C）= 0.7，则： （1）互补链中（A+G）/（T+C）= ？
（2）在整个DNA分子中（A+G）/（T+C）= ？
（3）若一条链中（A+ T）/（G +C）= 0.7，则互补链中（A+ T）/（G +C）= ？ （4）在整个DNA分子中（A+ T）/（G +C）= ？
35． 简述下列因素如何影响DNA的复性过程： （1） 阳离子的存在；（2）低于Tm的温度；（2）高浓度的DNA链。 酶化学
（二）英文缩写符号
1．NAD+（nicotinamide adenine dinucleotide） 2．FAD（flavin adenine dinucleotide） 3．THFA（tetrahydrofolic acid）
4．NADP+（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate） 5．FMN（flavin mononucleotide） 6．CoA（coenzyme A）
7．PLP（pyridoxal phosphate）
8．BCCP（biotin carboxyl carrier protein） 9．ACP（acyl carrier protein）
（五）是非判断题
（ ）1．酶促反应的初速度与底物浓度无关。
（ ）2．当底物处于饱和水平时，酶促反应的速度与酶浓度成正比。
（ ）3．某些酶的Km由于代谢产物存在而发生改变，而这些代谢产物在结构上与底物无关。 （ ）4．某些调节酶的V-[S]的S形曲线表明，酶与少量底物的结合增加了酶对后续底物分子的亲和力。
（ ）5．测定酶活力时，底物浓度不必大于酶浓度。
（ ）6．测定酶活力时，一般测定产物生成量比测定底物消耗量更为准确。
（ ）7．在非竞争性抑制剂存在下，加入足量的底物，酶促的反应能够达到正常Vmax。 （ ）8．碘乙酸因可与活性中心-SH以共价键结合而抑制巯基酶，而使糖酵解途径受阻。
（ ）9．诱导酶是指当细胞加入特定诱导物后，诱导产生的酶，这种诱导物往往是该酶的产物。 （ ）10．酶可以促成化学反应向正反应方向转移。
（ ）11．对于可逆反应而言，酶既可以改变正反应速度，也可以改变逆反应速度。 （ ）12．酶只能改变化学反应的活化能而不能改变化学反应的平衡常数。 （ ）13．酶活力的测定实际上就是酶的定量测定。 （ ）14．从鼠脑分离的己糖激酶可以作用于葡萄糖（Km=6×10-6mol/L）或果糖（Km=2×10-3mol/L），则己糖激酶对果糖的亲和力更高。
（ ）15．Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶浓度无关 （ ）16．Km是酶的特征常数，在任何条件下，Km是常数。
（ ）17．Km是酶的特征常数，只与酶的性质有关，与酶的底物无关。 （ ）18．一种酶有几种底物就有几种Km值。
（ ）19．当[S]>>Km时， V趋向于Vmax，此时只有通过增加[E]来增加V。 （ ）20．酶的最适pH值是一个常数，每一种酶只有一个确定的最适pH值。
（ ）21．酶的最适温度与酶的作用时间有关，作用时间长，则最适温度高，作用时间短，则最适
温度低。
（ ）22．金属离子作为酶的激活剂，有的可以相互取代，有的可以相互拮抗。 （ ）23．增加不可逆抑制剂的浓度，可以实现酶活性的完全抑制。 （ ）24．竞争性可逆抑制剂一定与酶的底物结合在酶的同一部位。
（ ）25．由1g粗酶制剂经纯化后得到10mg电泳纯的酶制剂，那么酶的比活较原来提高了100倍。
（ ）26．酶反应的最适pH值只取决于酶蛋白本身的结构。 （ ）27．所有B族维生素都是杂环化合物。
（ ）28．B族维生素都可以作为辅酶的组分参与代谢。 （ ）29．脂溶性维生素都不能作为辅酶参与代谢。
（ ）30．除了动物外，其他生物包括植物、微生物的生长也有需要维生素的现象。 （ ）31．植物的某些器官可以自行合成某些维生素，并供给植物整体生长所需。 （ ）32．维生素E不容易被氧化，因此可做抗氧化剂。 （六）问答题及计算题
1． 怎样证明酶是蛋白质？
2．简述酶作为生物催化剂与一般化学催化剂的共性及其个性？ 3．试指出下列每种酶具有哪种类型的专一性？
（1）脲酶（只催化尿素NH2CONH2的水解，但不能作用于NH2CONHCH3）；
（2）β-D-葡萄糖苷酶（只作用于β-D-葡萄糖形成的各种糖甘，但不能作用于其他的糖苷，例如果糖苷）；
（3）酯酶（作用于R1COOR2的水解反应）；
（4）L-氨基酸氧化酶（只作用于L-氨基酸，而不能作用于D-氨基酸）； （5）反丁烯二酸水合酶[只作用于反丁烯二酸（延胡索酸），而不能作用于顺丁烯二酸（马来酸）]； （6）甘油激酶（催化甘油磷酸化，生成甘油-1-磷酸）。
4．称取25mg蛋白酶配成25mL溶液，取2mL溶液测得含蛋白氮0.2mg，另取0.1mL溶液测酶活力，结果每小时可以水解酪蛋白产生1500μg酪氨酸，假定1个酶活力单位定义为每分钟产生1μg酪氨酸的酶量，请计算：
（1）酶溶液的蛋白浓度及比活。
（2）每克纯酶制剂的总蛋白含量及总活力。
5．Vmax与米氏常数可以通过作图法求得，试比较V~[S]图，双倒数图，V~V/[S]作图，[S]/V~[S]作图及直接线性作图法求Vmax和Km的优缺点？ 6．（1）为什么某些肠道寄生虫如蛔虫在体内不会被消化道内的胃蛋白酶、胰蛋白酶消化？ （2）为什么蚕豆必须煮熟后食用，否则容易引起不适？
7．使用下表数据，作图判断抑制剂类型（竞争性还是非竞争性可逆抑制剂）？ [S] mmol/L 2.0 3.0 4.0 10.0 15.0 每小时形成产物的量 （μmol） 13.9 17.9 21.3 31.3 37.0 （没有抑制剂） 每小时形成产物的量（μmol） 8.8 12.1 14.9 25.7 31.3 （有抑制剂） 8．甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Mr 150 000）的活性位点有一个Cys残基，假定为使5mL的1.2mg/mL的酶溶液完全失活，需要3.0×10 -2mg碘乙酰胺（Mr 185），计算酶的催化亚基的数目？ 9．对活细胞的实验测定表明，酶的底物浓度通常就在这种底物的Km值附近，请解释其生理意义？为什么底物浓度不是大大高于Km或大大低于Km呢？
10．有时别构酶的活性可以被低浓度的竞争性抑制剂激活，请解释？ 11．（1）对于一个遵循米氏动力学的酶而言，当[S]=Km时，若V=35μmol/min，Vmax是多少μmol/min？ （2）当[S]=2×10 -5mo/L，V=40μmol/min，这个酶的Km是多少？ （3）若I表示竞争性抑制剂，KI=4×10-5mol/L，当[S]=3×10-2mol/L和[I]=3×10-5mol/L时，V是多少？
（4）若I是非竞争性抑制剂，在KI、[S]和[I]条件与（3）中相同时，V是多少？ （2）计算[S]=1.0×10-6mol/L和[S]=1.0×10-1mol/L时的v？ （3）计算[S]=2.0×10-3mol/L或[S]=2.0×10-6mol/L时最初5min内的产物总量？ （4）假如每一个反应体系中酶浓度增加到4倍时，Km，Vmax是多少？ 12．在很多酶的活性中心均有His残基参与，请解释？ 13．将下列化学名称与B族维生素及其辅酶形式相匹配？ （A）泛酸；（B）烟酸；（C）叶酸；（D）硫胺素；（E）核黄素；（F）吡哆素；（G）生物素。 （1）B1 ；（2）B2 ；（3）B3 ；（4）B5 ；（5）B6 ； （6）B7 ；（7）B11； （8）B12。 (Ⅰ)FMN；(Ⅱ)FAD；(Ⅲ)NAD+；(Ⅳ)NADP+；(Ⅴ)CoA；(Ⅵ)PLP；(Ⅶ)PMP；(Ⅷ)FH2，FH4；(Ⅸ)TPP。 14、影响酶促反应的因素有哪些？用曲线表示并说明它们各有什么影响？
15、有淀粉酶制剂1克，用水溶解成1000ml，从中取出1ml测定淀粉酶活力，测知每5分钟分解0.25克淀粉，计算每克酶制剂所含的淀粉酶活力单位数（淀粉酶活力单位规定为：在最适条件下，每小时分解1克淀粉的酶量为一个活力单位）。
16、试比较酶的竞争性抑制作用与非竞争性抑制作用的异同。 17、什么是米氏方程，米氏常数Km的意义是什么？试求酶反应速度达到最大反应速度的99％时，所需求的底物浓度（用Km表示）
18、什么是同工酶？为什么可以用电泳法对同工酶进行分离？同工酶在科学研究和实践中有何应用？
19、举例说明酶的结构和功能之间的相互关系。
20、试述维生素与辅酶、辅基的关系，维生素缺乏症的机理是什么？ 三、习题解答 （二）（二）英文缩写符号
1．NAD+ （nicotinamide adenine dinucleotide）：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸；辅酶Ⅰ。 2．FAD（flavin adenine dinucleotide）：黄素腺嘌呤二核苷酸。 3．THFA（tetrahydrofolic acid）：四氢叶酸。
4．NADP+（nicotinamide adenine dinucleotide phosphate）：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸；辅酶Ⅱ。 5．FMN（flavin mononucleotide）：黄素单核苷酸。 6．CoA（coenzyme A）：辅酶A。 7．ACP（acyl carrier protein）：酰基载体蛋白。 8．BCCP（biotin carboxyl carrier protein）：生物素羧基载体蛋白。 9．PLP（pyridoxal phosphate）：磷酸吡哆醛。 （五）是非判断题
1．错：酶促反应的初速度与底物浓度是有关的，当其它反应条件满足时，酶促反应的初速度与底物浓度成正比。
2．对：当底物足够时，酶浓度增加，酶促反应速度也加快，成正比。
3．对：Km是酶的特征性常数，反应的代谢产物可能影响酶性质的改变从而影响Km的变化，而这些代谢产物在结构上并不与底物一致。 4．对：调节酶大多数为变构酶，变构酶是利用构象的改变来调节其催化活性的酶，是一个关键酶，催化限速步骤，当少量底物与酶结合后，使酶的构象发生改变从而能结合更多的底物分子。
5．错：底物应该过量才能更准确的测定酶的活力。 6．对：产物生成量比底物消耗量更易测得且准确。
7．错：非竞争性抑制剂只和酶与底物反应的中间产物结合，酶促反应的Vmax是减小的，不能通过增加底物来达到正常的Vmax。而竞争性抑制剂可以通过增加底物的浓度来达到Vmax。
8．对：碘乙酸是糖酵解过程中的一个抑制剂，与半胱氨酸或蛋氨酸的-SH结合，使糖酵解途径受阻。
9．错：诱导物一般为酶的作用底物，可诱导细胞产生特定的诱导酶。
10．错：对于可逆反应而言，酶既可以改变正反应速度，也可以改变逆反应速度，但不改变化学反应的平衡点。 11．对。
12．对：酶通过降低化学反应的活化能加快化学的反应速度，但不改变化学反应的平衡常数。 13．对：检查酶的含量及存在，不能直接用重量或体积来表示，常用它催化某一特定反应的能力来表示，即用酶的活力来表示，因此酶活力的测定实际上就是酶的定量测定。
14．错：Km值可以近似地反应酶与底物亲和力，Km越低，亲和力越高，因此已糖激酶对葡萄糖的亲和力更高。
15．对：Km是酶的特征常数之一，一般只与酶的性质有关，与酶浓度无关。不同的酶，Km值不同。
16．错：Km作为酶的特征常数，只是对一定的底物、一定的pH值、一定的温度条件而言。 17．错：见上题，同一种酶有几种底物就有几种Km值，其中Km值最小的底物一般称为酶的最适底物。 18．对。
19．对：当[S]>>Km时，V趋向于Vmax，因此v=K3[E]，所以可以通过增加[E]来增加V。 20．错：酶的最适pH值有时因底物种类、浓度及缓冲液成分不同而不同，并不是一个常数。 21．错：酶最适温度与酶的作用时间有关，作用时间越长，则最适温度低，作用时间短，则最适温度高。
22．对：金属离子作为酶的激活剂，有的可以相互取代，如Mg2+作为激酶等的激活剂可以被Mn2+取代；有的可以相互拮抗，如Na+抑制K+ 的激活作用。
23．对：不可逆抑制剂通常以比较牢固的共价键与酶结合，而使酶失活，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂而恢复酶的活性，因此增加不可逆抑制剂的浓度，可以实现酶活性的完全抑制。 24．错：竞争性可逆抑制剂可以与酶的底物结合在酶的同一部位，也可以与酶的底物结合在酶的不同部位，由于空间位阻或构象改变的原因而不能同时结合。
25．错：因为不知道纯化前后的比活分别是多少，因此无法计算比活的提高倍数。
36．错：酶反应的最适pH值不仅取决于酶蛋白本身的结构，还与底物种类、浓度及缓冲液成分有关。
27．错：B族维生素中维生素B3不含环状结构，其余都是杂环化合物。 28．对：所有B族维生素都可以作为辅酶或辅酶的组分参与代谢。 29．错：维生素K可以作为γ-羟化酶的辅酶，促进凝血。
30．对：如酵母的生长需要维生素B6等，植物的生长也有需要维生素的现象。
31．对：如豌豆子叶可以合成维生素C，供整体使用；去除子叶后，则豌豆子叶生长不良。 32．错：维生素E极易被氧化，因此可做抗氧化剂。
（六）问答题及计算题（解题要点） 1．答：（1）酶能被酸、碱及蛋白酶水解，水解的最终产物都是氨基酸，证明酶是由氨基酸组成的。 （2）酶具有蛋白质所具有的颜色反应，如双缩脲反应、茚三酮反应、米伦反应、乙醛酸反应。
（3）一切能使蛋白质变性的因素，如热、酸碱、紫外线等，同样可以使酶变性失活。 （4）酶同样具有蛋白质所具有的大分子性质，如不能通过半透膜、可以电泳等。 （5）酶同其他蛋白质一样是两性电解质，并有一定的等电点。
总之，酶是由氨基酸组成的，与其他已知的蛋白质有着相同的理化性质，所以酶的化学本质是蛋白质。 2．答：（1）共性：用量少而催化效率高；仅能改变化学反应的速度，不改变化学反应的平衡点，酶本身在化学反应前后也不改变；可降低化学反应的活化能。
（2）个性：酶作为生物催化剂的特点是催化效率更高，具有高度的专一性，容易失活，活力受条件的调节控制，活力与辅助因子有关。 3．（1）1982年，美国的T.Cech发现原生动物四膜虫的26S rRNA前体能够在完全没有蛋白质的情况下，自我加工、拼接，得到成熟的rRNA。
（2）1983年，S.Atman和Pace实验室研究RNase P时发现，将RNase P的蛋白质与RNA分离，分别测定，发现蛋白质部分没有催化活性，而RNA部分具有与全酶相同的催化活性。 （3）1986年，T.Cech发现在一定条件下，L19 RNA可以催化Poly C的切割与连接。 4．答：（1）绝对专一性；（2）相对专一性（族专一性）；（3）相对专一性（键专一性）； （4）立体专一性（旋光异构专一性）；（5）立体专一性（顺反异构专一性）；（6）立体专一性（识别从化学角度看完全对称的两个基团）。 5．答：（1）蛋白浓度=0.2×6.25mg/2mL=0.625mg/mL； （2）比活力=（1500/60×1ml/0.1mL）÷0.625mg/mL=400U/mg； （3）总蛋白=0.625mg/mL×1000mL=625mg； （4）总活力=625mg×400U/mg=2.5×105U。 6．答：（1）V~[S]图是双曲线的一支，可以通过其渐近线求Vmax，V=1/2Vmax时对应的[S]为Km；优点是比较直观，缺点是实际上测定时不容易达到Vmax，所以测不准。
（2）1/V~1/[S]图是一条直线，它与纵轴的截距为1/Vmax，与横轴的截距为-1/Km，优点是使用方便，Vmax和Km都较容易求，缺点是实验得到的点一般集中在直线的左端，作图时直线斜率稍有偏差，Km就求不准。 （3）V~V/[S]图也是一条直线，它与纵轴的截距为Vmax，与横轴的截距为Vmax/Km，斜率即为-Km，优点是求Km比较方便，缺点是作图前计算较繁。
（4）[S]/V~[S]图也是一条直线，它与纵轴的截距为Km/Vmax，与横轴的截距为-Km，优缺点与V~V/[S]图相似。
（5）直接线性作图法是一组交于一点的直线，交点的横坐标为Km，纵坐标为Vmax，是求Vmax和Km的最好的一种方法，不需计算，作图方便，结果准确。 7．答：（1）一些肠道寄生虫如蛔虫等可以产生胃蛋白酶和胰蛋白酶的抑制剂，使它在动物体内不致被消化。
（2）蚕豆等某些植物种子含有胰蛋白酶抑制剂，煮熟后胰蛋白酶抑制剂被破坏，否则食用后抑制胰蛋白酶活性，影响消化，引起不适。
8．答：作1/V~1/[S]图，可知是竞争性可逆抑制剂。 9．答：（1）酶量（mmol）=1.2×5/150 000=4.0×10-5mmol； （2）碘乙酰胺量（mmol）=3.0×10-2/185=1.6×10-4mmol，所以酶的催化亚基数为4。
10．答：据V~[S]的米氏曲线，当底物浓度大大低于Km值时，酶不能被底物饱和，从酶的利用角度而言，很不经济；当底物浓度大大高于Km值时，酶趋于被饱和，随底物浓度改变，反应速度变化不大，不利于反应速度的调节；当底物浓度在Km值附近时，反应速度对底物浓度的变化较为敏感，有利于反应速度的调节。
11．答：底物与别构酶的结合，可以促进随后的底物分子与酶的结合，同样竞争性抑制剂与酶的