答：实时定量PCR反应在带透明盖的塑料小管中进行，激发光可以直接头孤傲管盖，使其中的荧光探针被激发。一逛探针事先混合在PCR反应液中，只有与DNA 结合之后，才能被激发发出荧光。随着新和成DNA片段的增加，结合到DNA上的荧光探针，即被激发产生的荧光增加。 6反式作用因子的结构特点及其对基因表达的调控
答：反式作用因子是能直接或间接的识别或结合在各类顺式作用元件核心序列上，参与调控靶基因转录效率的蛋白质。这些因子有两种独立的活性: 特异地与DNA结合位点相结合，然后激活转录。两种活性可以独立分配给特定的蛋白结构域，分别称作DNA结合结构域和激活结构域，两者是相分离的。它们在蛋白质的不同区域。 简述原核生物和真核生物 mRNA 的区别。
答：1，原核生物 mRNA 常以多顺反子的形式存在。真核生物 mRNA 一般以单顺反子的形式存在；2，原核生物 mRNA 的转录与翻译一般是偶联的，真核生物转录的 mRNA 前体则需经转录后加工，加工为成熟的 mRNA 与蛋白质结合生成 信息体后才开始工作；3，原核生物 mRNA 半寿期很短，一般为几分钟 ，最长只有数小时。真核生物 mRNA 的半寿期 较长， 如胚胎中的 mRNA 可达数日；4，原核与真核生物 mRNA 的结构特点也不同，原核生物的 mRNA 的 5’端无帽 子结构，3’端没有或只有较短的 poly A 结构。
1.叙述由一段DNA序列形成多种蛋白产物的机制。
答：由一段DNA形成多种蛋白产物的可能机制有：阅读框不同、抗终止作用、可变剪切和RNA编辑。
重叠基因在фX174中最早发现，两个邻近的基因以一种巧妙的方式发生重叠，转录出来的mRNA以不同的阅读框阅读并被表达，产生两种以上的蛋白产物。在λ噬菌体中有不同时期表达的操纵子，如左向早期操纵子可以转录出两种mRNA，这是由于依赖于ρ因子的终止作用以及早期基因编码的抗终止蛋白的抗终止作用造成的。抗终止蛋白与RNA聚合酶结合后修饰了酶的构象，使其不再识别弱终止子，从而使一段DNA可以转录出多种mRNA，从而产生两种以上的蛋白产物。
真核生物的hnRNA含有内含子，通过剪接可将其出去形成Mrna,但有的高等真核细胞存在可变剪接，即来自一个基因的RNA，其某个内含子的5‘供体在不同的条件下和不同内含子的3’受体进行剪接，从而将来自一个基因的mRNA前体剪接产生多种mRNA，翻译出不同的蛋白质。另外，在真核生物中存在RNA编辑，将mRNA在转录后进行插入、缺失或核苷酸的替换，改变DNA 模板的遗传信息，从而翻译出氨基酸序列不同的多种蛋白质。
1、 各种二核苷酸对的排列顺序不同，对双螺旋结构的影响不同。 （1） 请问那种的Tm最低？
答：的Tm值最低。
（2） 含这种二核苷酸的序列有那些，为什么？（7分）
答：含有A/T的主要有复制起始点、原核生物启动子的-10区、真核生物启动子的TATA框，此外，还有生物体选择以UAA作为最有效的终止密码子。 DNA在复制和转录时要在起始原点和启动子区形成起始复合物，复制起始点、原核生物启动子的-10区、真核生物启动子的TATA框富含AT对，二者之间有两条氢键，在此处易于解开双链，容易形成起始复合物，使复制和转录过程顺利进行。生物体选择以UAA作为最有效的终止密码
子，因为在64的密码子中，假使UAA具有和它配对的反密码子，所形成的产物在生理条件下也是不稳定的，有利于肽链的释放，而且UAA 很少发生无义抑制突变，有利于肽链的正常终止。 真核生物和原核生物在翻译的起始过程有哪些区别？ 原核生物 真核生物 甲硫氨酸 起始氨甲酰甲硫氨酸 基酸 起始fMet-tRNAi*fMeMet-tRNAi*Met t AA-tRNA 起始复30S小亚基首先40s小亚基先与Met-tRNA*Met相合物形与mRNA模板相结合，再与模板mRNA结合，最成 结合，再与后与60S大亚基结合成80S。fMet-tRNA*fMetmRNA。Met-tRNA*Met起始复合结合，最后与50S物 大亚基结合 核糖体 较小，70S 较大80S 较多 起始因较少 子 mRNA 无帽子结构 有帽子结构和多聚A尾巴，都参与形成翻译起始复合物 21、 RNAi技术的基本原理。
RNAi技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA从而阻断靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。原理就是，短片段的双链RNA在体内能在酶（Dicer）及相关复合物（RISC）的作用下，变成单链分子，并与目标基因mRNA互补，在Dicer酶作用下，是mRNA发生剪切，转录受抑制或翻译受到抑制，从而在转录水平或转录后水平干扰基因表达。
22、操纵子：弱化子: 葡萄糖效应（代谢物阻遏效应、降解物抑制作用）：安慰性诱导物：23、乳糖操纵子的调控模型。 主要内容：
① Z、Y、A基因的产物由同一条多顺反子的mRNA分子所编码 ② 这个mRNA分子的启动子紧接着操纵区（O区），而位于阻遏基因I与操纵基因O之间的启动子区（P），不能单独起动合成β-半乳糖苷酶和透过酶的生理过程。
③ 操纵基因是DNA上的一小段序列（仅为26bp），是阻遏物的结合位点。 ④当阻遏物与操纵基因结合时，lac mRNA的转录起始受到抑制。 ⑤诱导物通过与阻遏物结合，改变它的三维构象，使之不能与操纵基因结
合，从而激发lac mRNA的合成。当有诱导物存在时，操纵基因区没有被阻遏物占据，所以启动子能够顺利起始mRNA的合成。