少；反之，则代谢微弱的细胞也能还原美蓝，不被染色，从而使观察到的死细胞较少，活细胞较多。
2、显微镜下细菌 放线菌 酵母菌和霉菌的主要区别是什么？
放线菌与细菌需要在油镜下才能观察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍镜下即可看到。 细菌：为细而短的单细胞微生物（个体微小），主要形态有：球、杆、螺旋状等。（部分杆菌还可形成芽孢）
放线菌：存在分枝丝状体和菌丝体，革兰氏阳性菌，有孢子丝和孢子（球形、椭圆形、杆状、柱状）。
酵母菌：单细胞，菌体呈圆球、卵形或椭圆形，少数呈柠檬形、尖形等。菌体比细菌大几倍到几十倍，部分处于出芽繁殖过程中菌体还可观察到芽体，大多数菌体上还有芽痕。 霉菌：菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多，常是细菌菌体宽度的几倍到几十倍，在低倍镜下即可看到，并还可看到孢子囊梗、囊轴、孢子囊、包囊孢子等。
3、测定细胞数目的方法有直接计数法（如血球计数板计数计数）和间接计数法（如平板菌落计数法）
显微镜计数的优点是直观、快速、操作简单，缺点是所测得的结果通常是死菌体和活菌体的总和，且难以对活动性强的活菌进行计数。
其中血细胞计数板较厚，不能使用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞，霉菌孢子等计数。
4、稀释平板计数法
将一定量的样品经十倍稀释后,用平板培养最后三个稀释度的样品稀释液。待菌落长出后,计数出某一稀释度的菌落数后再乘以稀释倍数,即为样品中的含菌数。 5、显微直接计数
利用血球计数板或细菌计数板在显微镜下测计出每小格的微生物细胞数量后,再换算出单位体积中微生物细胞总数的测数方法。
六、环境因子对微生物生长的影响
1、pH对微生物生长作用的原理是什么？细菌、真菌和放线菌所需要的最佳pH为多少？ 答案：pH对微生物生长作用的原理是：使蛋白质和核酸等大分子物质的电荷发生变化影响微生物活性；影响细胞膜表面电荷，进而影响微生物对营养物质的吸收；改变环境中营养物质的可给性及有毒物质的毒性。细菌要求pH为7.0-7.2，真菌pH自然，放线菌pH为7.2-7.4。
2、重金属对微生物影响的机理是什么？
答案：使菌体变性或与-SH基结合，导致微生物酶失活。 3、氯化钠等盐类对微生物的影响机理？
答案：通过调节微生物细胞的渗透压影响微生物。
七、培养基的配制、消毒、灭菌与土壤微生物分离 1、培养基配制原则是什么？
答案：目的明确；根据微生物的营养需要；注意各种营养物质的浓度配比；要控制具体pH、渗透压、水活度和氧化还原电位；经济。 2、培养基配制应注意什么？
答案：称取药品蛋白胨时要迅速，防止吸潮；培养基融化时要不断搅拌以防烧焦；针对不同的培养基要调节适当的pH；培养基灭菌时应按高压蒸汽灭菌锅的操作过程进行，以免危险发生。灭菌后培养基要及时处理，防止凝固或污染。 3、为什么培养微生物时，平板培养基要倒置？
答案：第一培养基倒置可以防止冷凝水落到培养基表面，使菌落分散开；第二可以防止空气对流，污染培养基。
4、为什么高压蒸汽灭菌效果好？
答案：因为在湿热情况下，湿热的穿透力强，菌体吸收水分使蛋白质容易凝固，而且当蒸汽与菌体接触后冷凝成水时可以放出热量，进而提高锅内的温度。 5、如何使用高压蒸汽灭菌锅？
答案：首先检查灭菌锅内的水是否没过电阻丝，然后放上装有物品的内桶。注意物品不要过多。将盖子上的通气管插入内桶壁上的管槽内，盖上盖子，用对角的方式旋紧螺扣，接通电源，开始灭菌。当压力指针达到0.05KPa时打开放气阀放气，反复放气三次以便排除锅内的冷空气。放气结束后，使指针升到压力为0.1KPa，并通过人为控制电源的开闭，在0.1KPa压力下维持20-30min。灭菌结束后，通过冷却使锅内的压力下降到0.05，打开压力阀放气，待压力为0时，对角旋开螺扣，取出物品即可。
6、分离土壤微生物时，细菌、酵母、真菌和放线菌的培养基分别是什么？ 答案：细菌：营养琼脂培养基 PH 7.0-8.0
放线菌：高氏一号培养基 PH 7.5-8.5
酵母菌：麦芽汁培养基 PH 3.8-6.0 YPDA培养基
霉菌：马铃薯培养基 PH 4.0-5.8 7、 做空白对照实验的目的?
答：目的是检验培养基是否受到污染，验证无菌操作。 8、半固体穿刺法
将待检细菌穿刺接种在半固体试管培养基中,若细菌仅沿穿刺线生长,说明细菌不运动。若细菌沿穿刺线向周围扩散生长,说明细菌有运动性。 9、为什么分装于三角瓶中的培养基装量不能过多？
答：①分装量太多，三角瓶内培养极易沾染瓶口及棉塞而造成污染；②分装量太多不利于震荡摇匀；③分装量太多会使培养基灭菌不彻底。
10、选择培养基:根据使用的目的,控制培养基的组成成分,使之有利于某种微生物的生长而限制其它微生物的生长,从而能从自然界混杂的群体中分离出某一种单一的微生物。如无氮培养基用来分离土壤中的自生固氮菌。
11、加富培养基:在基本培养基中加入血清,动植物组织液或者其它生长因子而配制出来的营养特别丰富的培养基。
12、鉴别培养基:根据微生物的代谢特点,通过指示剂的显色反应,用以鉴别不同微生物的培养
八、细菌的生理生化反应 1、你如何解释淀粉酶是胞外酶？
答案：淀粉酶是胞外酶可以通过观察固体培养基表面的淀粉降解圈或透明圈的大小来解释。 2、糖发酵过程中如何证明有气体产生？
答案：在糖发酵过程中，有些微生物可以利用糖产生有机酸并产生气体，我们可以在发酵管中加入得汉氏小管，如果产气，小管内就会有气泡存在。 3、吲哚实验的原理是什么？
答案：吲哚实验的原理是：某些微生物可以分泌色氨酸酶，该酶将蛋白质中的色氨酸分解为吲哚和丙酮酸，吲哚可以与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚，进而证明色氨酸的分解。
4、甲基红实验的原理是什么？
答案：甲基红在pH中性时呈现橘黄色，而在酸性条件下则为红色，所以当葡萄糖被分解产生有机酸时，可以甲基红在酸性条件下则为红色。 5、伏-普实验的原理是什么？
答案：伏-普实验的原理是：该实验是用来检验某些细菌利用葡萄糖时可产生中性末端产物，如丙酮酸，丙酮酸进行缩合、脱羧生产乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被氧气氧化成二乙酰。二乙酰可以与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。 6、硫化氢实验原理是什么？
答案：硫化氢实验原理是：某些肠道细菌可以分解含硫有机物，并形成硫化氢，该气体与醋酸铅反应形成黑色的硫化铅沉淀。
34. 大肠菌群检验中为什么首先要用乳糖胆盐发酵管？
答：因为乳糖胆盐发酵管中的成分有溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群；胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖；看杜氏小管中是否有气体，判断是否为分解乳糖产酸产气的大肠菌群。 九、营养缺陷型的筛选与鉴定 1、紫外诱变的机理是什么？
答案：紫外诱变的机理是紫外线引起胸腺嘧啶二聚体，从而导致DNA结构改变，进而引起机体突变或死亡。
2、紫外线诱变后，为什么不能马上见光？
答案？由于紫外线诱变后，如果马上给以可见光照射，则菌体中会产生光复活酶，进而对突变进行修复。
3、什么是营养缺陷型？
答案：营养缺陷型是指用物理或化学诱变使其基因发生突变从而丧失某种生长因子的合成能力，必须在基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的突变型菌株，与之相对的是野生型菌株。
4、淘汰野生型的原理是什么？
答案：淘汰野生型也叫营养缺陷型的浓缩，由于抗生素（如青霉素等）可以抑制细菌细胞壁的形成，所以野生型在基本培养基中生长过程中，被杀死，而营养缺陷型则不能在在基本培养基中生长，但仍然存活，所以当再次转接到完全培养基中时，便可淘汰野生型。 5、筛选营养缺陷型时，为什么要不停搅拌？
答案：这样可以使微生物细胞均匀地接受紫外线辐射，提高突变率。 十、菌种的保藏
1、菌种保藏的原理是什么？
答案：采取不同手段使微生物的代谢活性处于最低状态。 2、菌种保藏的意义？
答案：菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。 3、斜面和液体石蜡保存菌种法所需的温度为多少？ 答案：斜面和液体石蜡保存菌种法所需的温度均为零上4℃ 4、斜面保存菌种法利弊？
答案：前者在斜面培养基表面接种培养后，储存在零上4℃冰箱中，简单、方便，不需要特殊设备等，但由于微生物与空气接触，所以保存时间短、需要定期接种传代，易污染，菌种特性易改变
5、液体石蜡保存菌种法利弊？
答案：该方法也具有简便实用，不需要经常移种。但保存时需直立放置，占用空间较大，不便携带。