① 标记试管：取装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，根据需要将培养的细菌做好标记。
② 接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接种，置37℃恒温箱中，培养24～48h。
③ 观察记录：取出以上试管，振荡2min。另取2支空试管相应标记菌名，分别加入2ml以上对应管中的培养液，加入50g/L α－萘酚(95％乙醇溶液)1ml，再加入40％NaOH0.4毫升，摇振混合，置37℃恒温箱中保温30min。试验时强阳性者约于5分钟后，可产生粉红色反应（长时间无反应，置室温过夜），次日不变者为阴性。若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。 注：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。 3. 甲基红试验（M.R.试验）
取装有葡萄糖蛋白胨水培养液的试管，接种需培养鉴定的细菌，经过夜培养后，加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。 4. 吲哚试验
① 试管标记：取装有蛋白胨水培养液的试管，根据需要培养的细菌做好标记。
② 接种培养：以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，第5管作空白对照不接种，置37℃恒温箱中培养24～48h。
③ 观察记录 ：加入1ml乙醚（作用是萃取出吲哚），震荡，静止片刻使分层，沿管壁再在培养液中慢慢加入10滴吲哚试剂，使试剂浮于培养物表面，形成两层，观察结果：如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”表示。 5、淀粉水解实验
把淀粉平板培养基平均分成3部分，分别接上提供的2种菌，留一区作为对照。置37℃培养箱内培养24h。将平皿取出，打开皿盖，加少量碘液于平板上，轻轻摇动平皿，使碘液均匀铺满整个平板。若菌苔周围有无色透明圈出现，说明淀粉已经被水解。透明圈的大小，说明该菌水解淀粉能力的大小。 6、触酶实验
取培养好的细菌于玻片上，然后滴加3%的双氧水数滴，观察结果。 若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。若有气泡产生，则说明该细菌具有过氧化氢酶。 注意：3%的双氧水现用现配。 7、三糖铁实验
以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变
红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌(e.coli)，则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如培养基接种后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。 五、实验结果与分析