设计总体思路：
原理：胎儿细胞膜表面有抗转铁蛋白受体(CD71) 抗体。通过阳性细胞分选和阴性细胞分选，富集到研究对象（唐氏筛查风险高于1/270 或孕妇年龄大于等于35 岁，或彩超筛查提示胎儿异常，或既往有畸形胎儿分娩史）的外周血中胎儿有核红细胞，然后通过荧光原位杂（FISH）特异性探针 CSP18/X/Y 进行胎儿性别的鉴定，如果能够成功鉴定出胎儿性别，进而通过 GLP13/21 探针鉴定 21 号染色体是否存在异常。 【磁性纳米粒子】作为不溶性载体，其具备的生物学特性使其表面可连接具有生物活性的物质，也可以和蛋白质偶联成为抗体的载体，包覆抗体的磁性纳米粒子可以与抗原物质进行特异性结合，形成抗原-抗体-磁性纳米粒子免疫复合物，利用它可以与特定细胞进行特异结合这个特点，在外加磁场作用下，将细胞分离，从而达到了分离特异性抗原物质的目的。抗原-抗体-磁性纳米粒子免疫复合物具备特异性识别作用和外加磁场辅助分离作用，可以实现胎儿有核红细胞的有效分离和富集。 【荧光原位杂交，（FISH）】是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的先进技术。它是用荧光基因标记特异性的 DNA 探针与待测样本进行原位退火杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，最终通过荧光信号的颜色、数目的异常或基因异常的细胞核组织样本进行检测和诊断，为染色体疾病提供了分子水平的诊断。
1.1诊断材料：抽取研究对象肘静脉血10ml，置于乙胺四乙酸二钾的抗凝管中室温保存，
血液标本在12h 之内处理。 1.2主要实验试剂： 抗体 CD71 (transferrin receptor 转铁蛋白受体)、CD45 (leukocyte commonantigen 白细胞共同抗原) 及 CD14 (Lipopolysacharide 白细胞分化抗原)偶联磁性纳米复合粒子，不含 Mg2+、 Ca2+的磷酸盐缓冲液，密度为1.077 的Ficoll梯度液上，
1.3主要实验仪器： Fe3O4/poly (St-co-MPS)/ SiO2复合粒子 前期试验中与吉林大学化学院纳米教研室成功构建
磁分离架 吉林大学化学学院
CD71 美国 BECKMAN COULTER 公司 CD14 美国 BECKMAN COULTER 公司 CD45 美国 BECKMAN COULTER 公司
GLP13/GLP21 探针（位点 DLEU2:13q14，DSCR2:21q22） 北京金菩嘉医疗科技有限公司
CSP18/CSPX/CSPY 探针（位点 CSP18：18p11.1—q11.1；CSPX：XP11.1—q11.1；CSPY：YP11.1—q11.1； 北京金菩嘉医疗科技有限公司 显微镜 Olympus Bx51
KPJ-1A 烤片机 天津天利航空机电有限公司 电热恒温水温箱 上海新苗医疗器械制造有限公司 电热恒温培养箱 DNP-9052BS 上海新苗医疗器械制造有限公司 震荡仪 海门市仪器制造有限公司 QL-901 离心机 北京医用离心机厂LDZ5-2
1.4方法
1、母血中胎儿细胞的富集分离
(1)分离单个核细胞 ：抗凝血与缓冲液混匀，置于梯度液上，离心，可见血浆与梯度
液间一层白色絮状细胞层，取出该层，洗涤，再离心，去上清，重复洗涤一次。
(2)阴性磁珠分选：将洗涤过的细胞悬液，处理后放入MSP磁细胞分离仪磁性分离，弃掉与磁场试管粘附的细胞，用吸管吸出远离磁场的细胞悬液，这就是细胞的阴性选择。 (3)阳性磁珠分选：将阴性选择的细胞经过一系列处理后，放入MSP细胞分离仪中磁性分选，取与磁场侧粘附的细胞，去除阴形的细胞，洗涤，再离心，去上清再洗涤一次，就是阳性选择。
2、荧光原位杂交
1）样本玻片制备及预处理：
(1)低渗KCl与阳性分选细胞水浴孵育； (2)加固定液预固定；
(3)离心去上清再加一次固定液固定； (4)吹打悬浮细胞滴片；
(5)染色体玻片老化，脱水，烘干。 2）FISH 操作步骤 (1)标本准备及变性
(2)探针混合物准备及变性 (3)探针与样本杂交 (4)甲酰胺洗涤
3、荧光显微镜观察结果：将玻片晾干后，加入 20ulDAPI 染色， 20min 后荧光显微镜下观察结果。
结果： 应用该方法研究组（母血组）产前诊断32例唐氏综合征筛查为高危的或有高风险因素的孕妇，成功富集到胎儿有核红细胞的例数为20例（由于存在于孕妇外周血中胎儿细胞数量非常稀少，所以，进行无创性诊断之前必须要先富集这些稀少的胎儿细胞。选择了单克隆抗体 CD45、CD14、及 CD71 抗体偶联磁性纳米粒子，前两者进行母血中细胞的阴性选择，后者对孕母外周血中的胎儿有核红细胞进行标记并且进行阳性选择然后通过 CSP18/X/Y 进行测出2例唐氏综合征胎儿，结果分别为XY，+21和XX，+21，其余标本均未见异常信号。利用该法从孕妇外周血中富集胎儿有核红细胞的富集率为62.5%。成功检测胎儿性别19例，其中1例因镜下未见Y染色体探针荧光信号，故误诊为女胎。研究组（母血组）中FISH法诊断男胎的灵敏度为94%，特异性为100%，诊断女胎的灵敏度为100%，特异度为94%。
结论：羊水量随妊娠月份不断增多，羊水脱落细胞也随着胎儿的增长而增多，但其中的活细胞比例却随着妊娠时间的增加逐渐减少，故规定在16～24 周间进行穿刺，因为此时羊水量较多易穿刺，一次取材20ml ，既能满足细胞培养需要的活细胞数，也不会因抽取羊水过多而引起阴道出血、流产等并发症的发生。本分子生物学方法诊断唐氏综合征为无创性的产前诊断，检测过程快速、准确、高效，较羊水穿刺胎细胞进行荧光原位杂交法具有无创及省力等优点，可望用于产前诊断唐氏综合症，是一种值得推广的方法。