华中农业大学本科课程考试试卷
考试课程与试卷类型： 植物生理生化实验 A 学年学期： 2010-2011-1 考试时间： 2011-01-07
姓名： 学号： 班级：
一、 名词解释(每题4分,共12分) 1. 淀粉酶 2. 斐林试剂 3. 电泳
二、 填空题(每空2分,共38分)
1. Folin-酚试剂法测定蛋白质含量时，第一步是发生双缩脲反应。第二步是蛋白质中的
芳香族氨基酸将磷钼酸和磷钨酸还原分别产生（1）和（2）深蓝色混合物。 2. 在测定萌发小麦种子淀粉酶活性的实验中，将淀粉酶液置于70℃下保温15分钟的目的是（3）。
3. 2,6-二氯酚靛酚蓝色溶液滴定含有2%草酸的抗坏血酸溶液时，当蒸发皿中的溶液呈
（4）色，且30秒内不褪色时说明达到了滴定终点。 4. 微量凯氏定氮法测定植物组织中总氮含量包括3个主要实验阶段。在酸消化阶段，可
以将植物组织中的有机氮转化为（5）。在蒸馏阶段，将无机态的氮转化为（6），被吸收液硼酸吸收后，吸收液的颜色从（7）变为（8）。在滴定阶段，利用标准浓度的（9）进行滴定。最后，就可计算出植物组织中的总氮含量。
5. 利用反相纸层析法可对油菜种子中的不饱和脂肪酸进行良好分离。其主要原理是利
用5种主要不饱和脂肪酸在固定相（10）和流动相（11）中（12）不同，在层析纸上移动速率就有差异。在显色后呈现的蓝灰色层析图谱中，跑得最快的是（13），最慢的是（14）。
6. 利用圆盘凝胶电泳法测定植物过氧化酶同工酶的实验中，聚丙烯酰胺凝胶是由单体
（15）和交联剂（16）在催化剂（17）和加速剂（18）引发下聚合成的三维网状亲水凝胶。
7. 在本学期的生物化学实验中，使用（19）法提取植物组织的DNA。
三、是非判断题(对的用√表示,错误的用×表示。每题2分,共10分)
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1. 凯氏定氮法测定植物组织中的总氮时，混合指示剂不能完全表示硼酸吸收和释放
NH3的状况。（ ）
2. 利用尿糖试纸法只能快速测定油菜种子中硫代葡萄糖苷含量的高低。（ ）
3. 在DNA提取过程中，在提取缓冲液中加入适量的柠檬酸钠和EDTA,可以完全抑制
DNase的活性。（ ） 4. 从花菜中提取抗坏血酸时，添加2%的草酸研磨植物组织的目的是提高Vc的稳定性
和便于滴定。（ ）
5. 离心管先要平衡，然后对称放在离心室中才能进行离心。（ ）
四、问答题（共40分）
1. 简述测定小麦萌发种子淀粉酶活性实验的基本原理和注意事项。（15分） 2. 试述植物组织DNA的提取与测定的主要步骤。（15分） 3. 简述圆盘凝胶电泳法测定植物POD同工酶的基本原理。（10分）
华中农业大学本科课程考试
参考答案与评分标准
考试课程：植物生理生化实验 学年学期：2010－2011－1
试卷类型：A 考试时间：2011-01-07
三、 名词解释(每题4分,共12分)
1. 淀粉酶: 能够水解直链或支链淀粉的α-1,4糖苷键产生糊精或极限糊精的酶
类。它包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。(4分) 2. 斐林试剂：碱性溶液A(氢氧化钠和酒石酸钾钠)和B液（硫酸铜溶液）等比例混
合组成的碱性铜溶液。(4分) 3. 电泳：带点颗粒在电场中向相反的电极移动的现象。(4分)
评分标准：名词意义与术语关键词的准确性3分，整句子的完成整性与流畅性1分。用另外的表述方法，只要意义完整可给分。
四、 填空题(每空2分,共38分) i. ii. iii. iv. v.
(1)磷钼蓝 (2)磷钨蓝 (3)钝化β-淀粉酶活性 (4)粉红色
(5)硫酸铵（或无机氮） (6)氨气 (7)紫红色 (8)蓝灰色或淡绿色粉 (9)盐酸 (10)石蜡-石油醚 (11)醋酸 (12)分配系数 (13)亚麻酸 (14)芥酸
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vi. vii.
(15)Acr或丙烯酰胺 (16)Bis或甲叉双丙烯酰胺 (17)AP或过硫酸铵 (18)TEMED或四甲基乙二胺 (19)盐溶
三、是非判断题(对的用√表示,错误的用×表示。每题2分,共10分) 6.
四、问答题（共40分）
1、简述测定小麦萌发种子淀粉酶活性实验的基本原理和注意事项。（15分）
答：基本原理：淀粉酶(包括α-淀粉酶、β-淀粉酶)水解直连淀粉，产生麦芽糖等还原糖。它可以还原3,5-二硝基水杨酸，生成红棕色的3-氨基,5-硝基水杨酸。（2分）利用α-淀粉酶耐热、β-淀粉酶不耐热的特点，钝化β-淀粉酶的活性，测定出α-淀粉酶的活性。利用总淀粉酶活性减去α-淀粉酶活性，就可以获得β-淀粉酶的活性。（1分）用比色法测定生成的麦芽糖。淀粉酶的活性与产生的还原性糖的量成正比，根据麦芽糖制作的标准曲线，计算出淀粉酶的活力。（2分）
注意事项：萌发小麦种子用蒸馏水研磨成匀浆，提高酶液的提取效率。（1分）70℃水浴中保温15分钟，钝化β-淀粉酶的活性。（1分）加1%淀粉40℃下预保温，继续准确保温5min。（1分）100℃沸水浴中反应10min。（1分）计算淀粉酶活性时注意稀释倍数，以免计算错误。（1分）
评分标准：只要抓住在小麦种子淀粉酶活性测定的原理和样品研磨、淀粉酶活性测定的温度设置、试剂的添加、活力的计算等步骤就可获得满分。
2、试述植物组织DNA的提取与测定的主要步骤。（15 分） 答：
① 称取新鲜的花椰菜2g，置于研磨中，加入研磨缓冲液5ml， 加入少许SDS粉末，
研磨至无明显大颗粒或糊状匀浆液。(2分)
② 将匀浆液完全转入1支50ml的刻度试管中，加入等体积的氯仿-异戊醇（24:1），
剧烈震荡30 秒后，转入2支10ml离心管中。平衡后，在4,000 rpm下离心5min。(2分) ③ 离心后，溶液分成3层。小心地用滴管吸取上层溶液至1个新的50ml刻度试管中。(1分)
④ 将试管置于72℃ 水浴中保温3min后，迅速置于流水中冲洗冷却到室温。加1/4
体积的5 mol/l的高氯酸钠溶液。(2分) ⑤ 再加入等体积的的氯仿-异戊醇（24:1），轻微震荡1min。转入2支10ml离心管
中。平衡后，在4,000 rpm下离心5min。(2分)
⑥ 小心地用滴管吸取上层溶液至烧杯中，缓慢加入2-3倍体积的预冷（-20℃）的
95%乙醇，用玻璃棒轻轻搅动，使纤维状的核酸沉淀缠绕在玻璃棒上。(1分) ⑦ 将核酸沉淀在烧杯内壁上轻轻挤压，以除去乙醇。先用5ml 0.1 X SSC溶解。再
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（×） 2.（×） 3.（×） 4.（√） 5.（√）
加入0.5ml 10 X SSC溶解，既可得到DNA的粗提物。(2分)
⑧ 取DNA的粗提物 0.5ml，加 4.5 ml 1 X SSC溶液，使溶液的体积为5ml（根据
DNA的浓度，叶可以适当稀释）。(1分)
⑨ 将溶液倒入石英比色皿，利用紫外分光光度计，测定DNA的A260。(1分) ⑩ 根据公式，就可以计算DNA的浓度和含量。(1分)
评分标准：只要抓住植物DNA提取和测定的主要实验步骤就可获得满分。
3．简述圆盘凝胶电泳法测定植物POD同工酶的基本原理。（10 分）
答：聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和N，N’-甲叉双丙烯酰胺在催化剂过硫酸胺以及加速剂四甲基乙二胺的催化下聚合成的凝胶。（2分）凝胶具有电荷效应和分子筛效应。（2分）。植物POD可以催化相同的生化反应，但是其分子的分子量、净电荷和分子形状有明显的差异，在电泳时泳动速率不同而被相互分离。（2分）利用POD催化H2O2分解并把联苯胺氧化为蓝色或棕褐色的产物的原理，将电泳后的凝胶置于含有H2O2和联苯胺的染色液中染色，就会出现蓝色或棕褐色的POD酶谱（3分）。根据谱带的位置和粗细，就可以观察到POD活性的相对大小。（1分）
评分标准：只要抓住植物凝胶电泳的概念与作用、POD同工酶的概念、分离与作用以及染色后出现的POD酶谱等要点就可获得满分。
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