纤维素分解菌群的分离和筛选
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(南京农业大学自然资源与环境科学院，京 2 0 9 )南 1 0 5摘要滤纸平扳法结合摇床培养筛选到 2纤维素分解能力较强的混合菌 Ml M2在以纤维素为碳源的个和。
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培养涟中，8 C振荡培养 4,纸纤维素失重率分别达 5 . 3和 5 . 2,经处理的稻草秆纤维素失重 2 滤 d 75 4 9未率为 3 . 2和 3 . 1。膨化稻草比稻草秆易分解，维素降解率可达 6 . 3和 6 . 2。经初步鉴定， 88 6 2纤 8 8 0 0 Ml由术霉和芽孢杆菌 B a组成， M2由术霉 F 2和芽孢耗菌 B a组成。实验结果表明，由真菌、细菌组成的混合菌分解纤维素的能力嘎显强千其中任何一个单一菌株，
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目前国内外对分解纤维素能力较强的术霉及其酶活性研究较多，关木霉与细菌的混有
合菌分解纤维索及其同相互作用的机理刚较少报道。本试验分离筛选到 2个纤维分解能力较强的混合菌，并对纤维索分解菌与其伴生菌的相关性作了初步的探讨，以期将之用于秸秆还田，速有机肥腐熟和提高土壤肥力。加
I材料与方法I1材料 .
采集于紫金山森林的土样和本校牧场的畜粪；海长虹塑料厂出品的粘度 6 0上 0~ 10 0c的羧甲基纤维素钠 (MC; 0 P C )稻草粉碎后用膨化机处理的膨化稻草；新华一号滤纸。
国家自然科学基金资助珂目 i收碥日期 l9 50—O 1 9 - 92
纤维素分解菌群的分离和筛选
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南
京
农
业
大
学
学
报
l 9卷
培养基为： I羧甲基纤维素钠 ( MC)养基Ⅲ; 2发酵培养基 I(/ )尿素 5 () C培 () gL:,K o., P ., S 7 2 ., e O 7 2 . 5 Mg O一 H2 . 2酵母浸出液 H2 P I K H O 1 Mg O. H 5 F S d H O 0 0, S O 0 0, 0
0 2稻草秆 (稻草粉 )0或滤纸条 I,馏水 ( 0,p .~ 72;3发酵培养基 .,或 2(∞蒸 10 0ml H 7 0 . ) ( )n(/: N 3 ., O。, a l 6 ., S j ., C ., e l0 0,草 g L) Na O 5 KH2 2 P I C C 2 H2 0 I Mg O 3 Na l 1 F C 3 . I稻 O 0 0
2( 0或滤纸条 1 )蒸馏水 10 0ml H自然；4固体滤纸培养基：酵培养基 l中加质量 0. 0,p ()发浓度为 2/ 0gL的琼脂 .草换成滤纸片，好平板后将滤纸片铺在培养基上。稻倒 I2方法 . I2 i纤维分解菌的分离和纯化 . .在滤纸平板上点样品，8 C培养 I 2 d出现透明斑，其 4将移入无菌水中进行系列稀释后涂于 C MC平板，8℃培养 4d分离得到单菌落。将所得单菌 2,落分别单独和相互配合回接到滤纸平板及 C MC平板上，者根据滤纸液化程度，者根据前后羧甲基纤维素酶相对活性来筛选分解纤维索能力较强的单菌株及混合菌群。
I 2 2纤维素分解苗的发酵培养 ( ) .. 】将菌种分别接至装有 5 1 0m以滤纸为唯一碳源的发酵培养基 1和 l中，8℃振荡培养 4d ( )菌种分别接至含有 5含稻草秆 (稻草 2。 2将 Oml或粉 )发酵培基养 IⅡ中，8℃振荡培养 4d的和 2。 12 3羧甲基纤维素酶相对活性测定 ..将菌种接种在 C MC平板上，8c培养 2d 2 。用质量浓度为 05m/ . g L的刚果红染色 5ri,去染液，溶解圈直径，计算 C n倾 a测并 MC酶相对活性 ( )A一溶解圈直径 (m)菌体培养时间 () A: c/ d 12 4纤维素含量测定 ..按重铬酸钾一量法测定铷。碘 I2 5稻草粉、纸失重的测定
用滤纸过滤发酵液，残留物 8+.滤将 0℃烘干称重，减重法用计算出稻草、纸失重率。滤 I2 6纤维素分解率的计算 ..分解率根据下式计算：…,X
对聩佯品纤维索含量×样品莺量一砖体纤维索含量×张体莺骨
2结果与分析 2 1纤维素分解菌的分离 .分别以滤纸和 CVC为唯一碳源反复进行初筛和复筛，得 2个混合菌 MI M2它们 I I获和，既能在滤纸平板上迅速分解滤纸，能迅速液化 C .养基。经初步鉴定， I由木霉 (又 MC培 M e￣ 'aF、/ om ) i芽孢杆菌 (￣/ sB组成 ) u B r#) a g M2由木霉 F、 2芽孢杆菌 B组成。 a表 l培井 3d后不同菌株 ( ) c群在嗽平板上的生长Tab e l Gr l ow t o s a od h fIol t I . s CM C ! a e a t r 3 d y u t e l f r fe I s c J t (t '
在 C MC平板上， 1F F、 2生长迅速、可铺满整个平板液化 C 8 d即但 MC较慢。MIM2则、可使 C MC迅速液化，且其中的 B并 a也能随着真菌的生长而向外扩散，快 C加 MC液化程度