组织培养 复习资料
绪论：
1、植物组织培养的概念：在无菌和人工控制的环境条件下，利用适当的培养基，对离体的植物器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或发育成完整植株的技术。又称植物离体培养。
2、简史（重要人物的学说及其重大贡献）
2-1探索阶段：⑴德国植物生理学家-Haberlandt是植物组培的先驱；
2-2奠基阶段：
2-3迅速发展和逐步实用化阶段：
3、组培的应用（主要是与农业的关系）：a 快速繁殖优良苗木；b培养无性植株；
第一章第二章
1、组织培养实验室的结构与功能、设备
1）组培实验室结构：包括化学实验室或准备室、接种室以及培养室三部分，并且按顺序排列。在化学实验室与接种室之间应留有缓冲空间。 c、育种上应用；d、工厂化育苗
2）功能及设备
（1）准备室：用于培养器皿的清洗、培养基的配制、分装和灭菌、试管苗的出瓶及整理等工作。
设备：冰箱、天平、高压灭菌锅、pH计、干燥箱、实验台、水槽、凉干架、药品柜、离心机、水浴锅、微波炉、电炉、磁力搅拌器、蠕动泵、移液器、各种玻璃器皿（烧杯、量筒、容量瓶、试剂瓶、三角瓶等）及培养基分装用品等。
（2）无菌操作室（接种室）：植物材料的灭菌、接种以及培养物的继代转接等。 设备：超净工作台、紫外灯、小推车、搁架、磁盘、接种工具（各种镊子、解剖刀、手术剪、普通剪刀接种针、酒精灯、手持喷雾器、细菌过滤器等）等。
（3）培养室：主要用于植物材料的培养。
设备：培养架及灯管、摇床（振荡器）、空调、自动定时器、加湿及除湿器、光照培养箱、温湿度计灯等。
2、各类物质消毒灭菌的方法
1）培养基：高压蒸汽灭菌（高温高压湿热灭菌法：压力在9.8×104—10.8×104Pa，温度在121℃，灭菌20—30min）、干热灭菌、过滤灭菌等；
2）玻璃器皿、塑料器皿和器械：①玻璃器皿灭菌--蒸汽高压消毒灭菌，干热消毒灭菌；②塑料器皿灭菌--多采用高压蒸汽消毒灭菌；③金属器械灭菌：灼烧灭菌浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用；
3）植物材料：一般采用药剂浸泡灭菌，具体操作如下：（1）外植体的预处理，对植物组织进行修整，去掉不需要的部分，并将外植体用流水冲洗干净。（2）用70%的酒精浸润材料30s 左右。（3）用灭菌剂浸泡灭菌，灭菌时不时搅动，使植物材料与灭菌剂有良好的接触，若灭菌过程中加入数滴表面活性剂，则灭菌效果更好。（4）植物材料用无菌水冲洗3--5 次，以除去灭菌剂；
4）无菌操作区：包括接种室的消毒、工作人员用工作服、口罩等的消毒、超净工作台的清洁与杀菌、操作工具的灭菌。
3、培养基的组成及配置注意事项，计算，常用植物激素的种类及作用
1）组成：矿质营养、有机成分、植物生长调节剂、碳源、琼脂以及其他附加物等
2）配制培养基应做好几点工作：⑴实验用具的准备：包括配制过程中所需电炉、酸
度计、高压灭菌锅等设备及其他玻璃器皿的清洗和准备；⑵试剂、药品的准备；
⑶根据培养基的配方、母液扩大倍数及需要配制的培养基体积计算所需各种母液及其他附加物的量。（4）具体操作如下：⑴取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯或搪瓷锅内，加蒸馏水加热使之溶解，并不断搅拌；⑵根据计算所需量依次加入大量元素、微量元素、铁盐、有机物、生长调节物质母液及其他特殊的附加物，搅拌均匀；⑶加水定容至规定体积，搅拌均匀；⑷调整培养基的pH值；⑸分装；⑹封口。
3）常见植物激素的种类及作用：1.生长素类：IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、NAA（萘乙酸）、2，4-D （主要促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形成愈伤组织，促进生根）；2.细胞分裂类：KT（激动素）、6-BA（苄基嘌呤）等（促进细胞分裂和扩大，促进茎增粗，抑制茎伸长；诱导芽的分化、促进侧芽萌发；延缓衰老）；3.赤霉素类：GA3、GA4等（可以诱导离体成花；打破休眠等功能）；4.脱落酸：ABA（促进休眠、衰老和脱落）；5.乙烯：ETH（主要促进衰老和脱落）。
第三章第四章
基本概念：
1、细胞全能性：植物体的每个生活细胞都具有该植物体的全部遗传信息，在特定的离体培养条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2、外植体：从活体植物上切取下来，用以进行离体培养的那部分组织或器官。
3、分化：指个体发育过程中，不同部位的细胞形态结构和生理功能发生改变，形成不同组织或器官。
4、脱分化：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构和功能而恢复分生能力，形成无组织结构的细胞团或愈伤组织的过程。
5、再分化：由脱分化形成的愈伤组织重新分化出特定细胞、组织和器官的过程。
6、器官发生途径：植物的离体器官发生是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成根、芽、茎等器官的过程。器官发生的过程（途径）分为两种：1、经过愈伤组织的器官发生2、不经过愈伤组织的器官发生
7、体细胞胚胎发生途径：植物离体培养的细胞、组织、器官产生类似胚的结构，其形成也经历一个类似合子胚胎发生和发育过程，这种现象称为植物体细胞胚胎发生，形成的类似胚的结构称为体细胞胚或胚状体。途径：1.直接途径：指从外植体某些部位的胚性细胞直接诱导分化出体细胞胚胎2.间接途径：外植体先脱分化形成愈伤组织，再由愈伤组织的某些细胞重新“决定”为胚性细胞，进而分化出体细胞胚胎。
8、愈伤组织：离体条件下生长的细胞、组织或器官经过脱分化形成的一团薄壁细胞。
9、人工种子：是指植物离体培养产生的胚状体或不定芽被包裹在含有营养和保护功能的人工胚乳和人工种皮中，从而形成能发芽出苗的颗粒体。作为繁殖材料。
10、褐化现象：褐变——是指外植体在培养过程，自身组织从表面向培养基释放出褐色物质，以致培养基逐渐变成褐色，外植体也随之进一步变褐而死亡的现象。
11、玻璃化现象：是指组培苗出现叶、嫩梢呈水晶透明或半透明，植株矮小肿胀，失绿，叶片皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表皮缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具有栅栏组织，仅有海绵组织；体内含水量高，但干物质、叶绿素、蛋白质、纤维素和木质素含量低的现象。
12、如何进行无菌操作接种外植体