物
生
物
技
术
第 6卷第 l期
3 . 2 1酶的最适作用温度
在 2 0~7 0" C的
不同温度下测定酶的活力，结果如图 1
Ta b 5 Ef fe c t o f t e mp e r a t u r e o n s t a b i l i t y 0 f f r e e a n d i mmo b i l i z e d L￣ p a s e 一 一 §} j
*F LRA= f
l i p a s e r e l a t i v e a c t i v i t y
I LRA= i mm b o l i z e d[[ p a s e r e l a t i v e a c t wi t y
结果表明：游离酶的最适作用温度为 3 6℃.固定化酶的最适作用温度为 4 8℃,比蝣离酶提高 1 2℃。3 . 2 . 2酶的热稳定性酶在 p H1 0 . 0缓冲
液中，置于不同温度的水浴中 .每隔 2 0 mi n取样，迅速冷却，测定残余酶活力(用未经处理的酶作对照 ),结果如表 5。 结果表明：固定化酶的热稳定性有 r很大的提高。 3 . 2 . 3酶作用的最适 p H值 在反应体系● I mmo b i l i z e d l i p a s e - F r e e l i p a s e
中加入不同 p H缓冲液 .在最适作用温度下
F 1 O p￣ mo r nt￣
t u r e f r e e a n d[ r n m￣i l i z e dl i p e c￣ e
测定酶活力.结果如表 6
Ta b 6 Op t i
mu m口 H 0 f f r e e a n d i mmo b i l i z e d t￣ p a s epH 4 0 5 0 6 0 7 0 8 0 9 0 9 4 1 0 0 10 6 I】 0 1 1 7
I LRA(%】
1 0
2 0
4 2
5 5
6 4
7 6
8 4
1 0 0
94
8 0
4 4
F L R A(%)
8
1 5
4 0
5 8
7 4
9 4
1 0 0
8 6
7 5
5 4
4 0
结果表明：游离酶作用最适口 H是 9 . 4 .该固定化酶作用最适 p H是 1 0 . 0,比游离酶高 0 . 6个 p H单位。
个 p H单位。 3 . 3 固定化脂肪酶操作的半衰期
将橄揽油和 K P 0 4一 Na OH缓冲液 (体酶于不同口 H积比为 1: 1 )与固定化脂肪酶 (酶量 5 u l橄榄油 ),在4 8℃恒温摇床上振荡反应 2 5 h,然后倾出油水混合物.而将固定化酶留下，供下一
3 . 2. 4 脂肪酶的 p H稳定性测定酶活力，结果如图 2。
的缓冲液中，置于 4℃冰箱 2 4 h,调至口 H1 0 . 0 结果表明：游离酶作用 p H稳定性范围为7 . 5~1 0. 5,固定化酶作用 p H稳定性范围为7 5~ l 1 . 5,固定化酶比游离酶增加 1 . 0
循环使用。固定化酶重复使用 1 3次，橄榄
油的水解率降为原来的一半，其半衰期为3 25h。
维普资讯
陈荐琳等： C M,葡聚糖凝胶固定化脂防酶的研究
合力较牢固，对于脂肪酶来说 .是~种较好的固定化方法。参考文献1 Mi l l e r C, Au s t i n H. Pa s o r k e l, Ch a r a c t e r i s t i c s
o f a n i mmo b i l i z e d 1 i p a s e f o r t h e c omme r c i a l
s y n t h e s i s o f c o . t e l"J A( K S. 1 9 8 8. 6 5 ( 6): 9 2 72 Za k s A. Kl i b a n o v M En z y mi c c a t a l y s i s i n F, D n a
q u e o u s s o l v e n t s』Bi o c h e m, 1 9 8 8 . 2 6 3 ( 7 1
3 1 9 43 B i s t l i n e J R G .B i l y k A .F e i r h e U e r S H Li p a s e c a t a l y z e df o r ma t i o n { a r t y a mi d e￣J A(硒p H
. 1 9 9 1 .
6 8( 2): 9 5- F r e e] i p a￣
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4 Ma t o s J .W e s t J t 3 .W o n g f 5 H Li p o s e c a t a 1 3 -s y nt he s i s o f p ep t i d e s:pr e par a t i o n a p e ni c i] i n G
F i g 2 Ef f e c t 0{p H O n s t a b i l i t y ) f c my me
p r ec ur s or a nd ot he r p e pt i d e s 1 3 i o t e c h Le t t,l9 87.9
4结
论
( 4,: 2 3 3
用离子吸附法进行酶固定化，条件温和，操作简便。制备得到的固定化酶 .固定化酶酶活力较高 .回收率也较高 .最适温度， p H都有 r提高，稳定性也提高了，,酶和载体间的结
5采俭 .生精化学实验 .上海：上海科学技术出版社， 1 9 8 1 . 1 3 6
6营原洁，副岛正美 .蛋白质的定量法北京农业出板社 . 1 9 8 1 . 1 8 6
张旭译
S t u d i e s of Li p a s e I mmo b i l i z e d o n CM De x t r a n Ge lCh e r￣Xi u l i n .Z h e n g Yi ,W a n g Sh a o z h a o ,S h i Qa o q i n ,W u S o n g g a n
( Fu j i a n I n s t i t u t e f o r Dr u g C o n t r o l,Fu z h o u 3 5 0 0 0 1; Bi o l o g i c a l En g i n e e r i n g ( ) d l e g e, F i a n No r ma !Un i v e r s i t y,Fu z h o u, 3 5 0 0 0 7)Ab s t r a c t Th e c o n d i t i o n s o f t h e] i p a s e i m mo b i l i z e d o n CM— De x t r a n Ge I a n d t h e c
h a r a c t e r i s t i c s o f t h e i mmo b i l i z e d 1 i p a s e h a v e b e e n s t u d i e s . Th e r e s u l t s o f t e h o p t i ma 1 c o n di t i o n s f o r i m mo b i l i z a t i o n
a r e t h a t p H i s 1 0 8, i o n i c s t r e n g t h i s 0 . 0 1 mo l/ L K P O4 - Na ( I H b u r f e r 1 i q u i d a n d i mmo b i l i z a t i o n r e a c t i o n t i me i s 8 h Wh e n t h e a mo u n t o f l i p a s e i s 1 2 5 U/ g s u p p o r t, t h e a c t i v i t y O f i mmo b i l i z e d l i p a s e i s 1 2 2 5 0 U/ g s u p p o r t Th e a c t i v i t y r e c o v e r y i s 9 8%. Th e i mmo b i l i z e d l i p a s e i s f a i r l ys t a b i l i t y I t s o p e r a t i o n a 1 h a l f t i me i s a b o u t 3 2 5 h a t 3 5℃ Th e o p t i mu m t e mp e r a t u￣ a n d p H f o r
i m mo b i l i z e d l i p a s e a r e d e t e r mi n e d t O b e 4 8℃ a n d p H l 0 0 r e s p e c t i v e l y.Ke y Wo r d s I i p a s e, I m mo b i l i z a t i o n .CM De x t r a n Ge 1 . En z y me c h a r a c t e r i s t i c s