真菌药用_固体发酵_上游工程建设基本研究方法
中国食用菌２００９，２８（４）：８—９，１４
ＥＤＩＢＬＥＦＵＮＧＩＯＦＣＨＩＮＡ
ＣＮ５３－１０５４／Ｑ
ＩＳＳＮ１００３—８３１０
真菌药用“固体发酵＂上游工程建设基本研究方法
庄
毅１，２
（１．南京中医药大学，南京２１００２９；２．江西中医学院菌物药研究中心，江苏南昌３３００２９）
摘要：真茵药用“固体发酵”是中药传统范畴内仅有的，也是历史上诞生最早的一类生物制药技术，并已发展走向“固体发酵系列工程”。固体发酵的上游工程建设，特别是发酵组合的优选、发酵工艺的制定等，对决定所产“茵质”的性效有重要影响。据研发槐耳、槐芪、灵雷３种“茵质”的经验、体会。提出几项基本研究方法，供业内各方参用、改进，以使达规范化。
关键词：固体发酵；真茵药物；回选试验；比较茵质；目标茵质
中图分类号：￥６４６．９文献标识码：Ａ文章编号：ｌ００３—鼬１０（２伽眵）０４－１１００８．由３
现代生物制药内涵丰富，如细胞工程、基因工程、发酵工程等都有重要作用。但生物制药技术在有几千年历史的中医药传统范畴内。曾被应用、发展的唯有真菌药用的“固体发酵工程”一项（液体发酵属近代引进工艺）。它在中国古代可统称为“制曲工艺”。是用各种植物性材料在适宜条件下经自然或引导真菌等生长、发酵后产品供药用，唐《药性论》记“神曲”，由北魏时期已开始制作，用麦麸、赤小豆、杏仁（去皮）、面粉等碎粉与鲜辣蓼、青蒿、苍耳等浆汁碎屑混合后．经酵母菌等多菌种自然发酵而成，味甘辛、性温、归脾胃经，功能清食消积健脾胃．沿用至今已ｌ５００余年历史．应是历史上最早的生物制药，其后较长时期内又曾制作了“红曲”
（元）、酱
制成真菌药物，将成为“菌物药”的重要支柱。
任何“固体发酵”上游工程，都由发酵菌种与发酵基质共同构成“发酵组合”，在一定环境条件下进行发酵的工程，除尚在探索的特困发酵外，其它固体发酵的发酵条件通常是适宜的温度、光照等，大多属于真菌生态的常规需要，其中有生命活动的发酵菌种常占主导。不同性质与配比的发酵基质是影响菌质性效的重要基础，因此，优选合理、有效的发酵组合是研发目标菌质的工作前提。
当发酵组合与发酵条件被确定后．还要研究能阐明发酵周期（时间）与正确判断其发酵终点的方法，这都需要进行多项预备性试验研究。与引进工艺“液体发酵”相比较，“固体发酵”除采用固态基质外，目前仍应用分散的发酵瓶内发酵的生产方式，它有发酵速度较慢、周期较长等特点，研究工作有一定困难。为此探索试验了有关建设其上游工程的几种常用研究方法。被试用于研发槐芪菌质昂嘲与是雷菌质【日等，取得较佳效果，应继续完善，以使规范化。
（梁）、酒酿（清）等品种，其发酵菌种与材料渐趋于单一。延伸至近代，由上世纪五十年代末进入“固体培养”时期。将一种特定真菌接种在发酵瓶内．即已经过灭菌处理的由农副产品组成的培养基（料）上，经培养生长大量菌丝体．称为“培养物”．一般被认为它与同种子实体有相同的药效作用。其生产工艺已有明显改进并已有初步的下游工程，产品如猴头菌片等。
发展到上世纪九十年代初，进入“固体发酵＂ｎＩ】时期。初期是真菌在由农副产品组成的“营养基质”上进行“普通发酵”产生“药用菌质”．它较适用于研发新品种的真菌药物。曾研发了槐耳菌质与槐耳颗粒（抗癌）闭。此后又为研制真菌类药材新资源开创了“双向发酵”１３１．在发酵基质中应用或掺用具有活性成分的中药材为“药性基质”。发酵后产生“药性菌质”，如槐芪菌质Ｂ（抗病毒）、灵雷菌质（免疫抑制等）等。２１世纪又开始探索“多菌发酵”、“特因发酵”等，应用不同生产工艺产生各类“菌质”．研
ｌ发酵组合三层优选法（３＋１优选法）
研制槐苠菌质Ｒ：以槐耳ＴｒａｍｅｔｅｓｒｏｂｉｎｉｏｐｈｉｌａＭｕｒｒ为发酵菌种，作为药性基质的初选药材多达１０１种，而“灵雷菌质”的发酵基质已定为雷公藤．其供初选的发酵菌种也有２２种，应用“发酵组合ｉ层优选法”能较迅速、正确的选定有效发酵组合。１．１第一层初选
以组合的发酵性状为指标．由供选菌种或基质。与已确定的另一方所构成的不同组合。在适宜条件下进行试验，如能正常发酵，并在适当时间内产生合格“菌质”，即双方能相互适应，此发酵组合即通过初选，否则即被淘
作者简介：庄毅，研究员，现任中国药学会天然药物分会药用真菌专业组顾问、中国菌物学会药用真菌专业委员会顾问等。收稿日期：２００９－０５—１３
万方数据
真菌药用_固体发酵_上游工程建设基本研究方法
第２８卷第４期庄毅：真菌药用“固体发酵”上游工程建设基本研究方法
９
汰。应注意观察纪录，如各试验组菌种和基质的种类、来源、生长年限与性状、品质等各种基本资料．在生长发酵后菌丝体色泽、生长速度、长势、生长达到半瓶期及全瓶期时所需的天数及日期等，以资比较。研发槐芪菌质Ｂ初选汰除率达２５％，灵雷菌质达２８％．即还有１６种菌种的菌质进入复选，其菌丝体生长的全瓶期最短１３ｄ一１７ｄ．。旺盛度３＋；最长１６ｄ～加ｄ，旺盛度ｌ＋，平均２６ｄ。由本项试验看来。大多数情况下菌丝体生长速度与旺盛度呈正相关趋势，如３号、４号菌种的全瓶期都是２０ｄ，菌丝体旺盛度３＋。对入选组合的菌质要计算、记录它们由基质发酵成为菌质的转化率、消耗率及干燥处理后的折干率等。
１．２第二层复选
主要根据各种有关成分的分析试验方法，分析比较各参选菌质的化学成分．如采用薄层色谱法等对各组菌质提取物进行分析比较．根据所显示的斑点、色泽、位置及Ｒ厂值等的异同情况对各组菌质进行分型归类。
雷公藤除ｌ号一１６号共１６组复选菌质外．又增设对照组ＣＫ。（雷公藤药材）：分析结果表明ＣＫ，色谱显示６个斑点，只有１６号菌质色谱与ＣＫ，相似，可能与其发酵
性状最差有关。其它１５种按其斑点色泽、位置及Ⅳ值等
与ＣＫ，比较后，可基本归纳出Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４种类型。每种类型都包含了３个一５个试样。
根据各种真菌的作用及发酵性状等．从４种类型中各
选一种为代表。即Ａ４号、Ｂ一８号、Ｃ—１０号、Ｄ—１４号，