实验二 0.5%维生素C注射剂的制备及质量评价
一、 实验目的
１． 掌握注射剂的生产工艺过程和操作要点。 ２． 掌握注射剂成品质量检查的标准和方法。 ３． 掌握注射剂稳定化方法。 ４． 了解注射剂灌装量的调节要求。
二、 实验指导
注射剂又称针剂，系将药物制成供注入体内的无菌制剂。注射剂按分散系统可分为四类，即溶液型注射剂、悬型注射剂、乳剂型注射剂、注射用无菌粉末（无菌分装及冷冻干燥。根据医疗上的需要，注射剂的给药途径可分为静脉注射、脊椎腔注射、肌肉注射、皮下注射和皮内注射五种。由于注射剂直接注入人体内部，故吸收快，作用迅速，为保证用药的安全性和有效性，必须对成品生产和成品质量进行严格控制。
注射剂的工艺流程：
以溶液型注射剂制备过程为例，其工艺流程如下， 主药
附加剂 溶解 过滤 补加溶剂 灌装 质检 包装 成品 80%溶剂 安瓿 检查 洗涤 干燥 注射剂的质量要求：
一个合格的注射剂必须是澄明度合格、无菌、无热原、安全性合格（无毒性、溶血性和刺激性）、在贮存期内稳定有效，pH值、渗透压（大容量注射剂）和药物含量应符合要求。注射液的pH值应接近体液，一般控制在4～9范围内，特殊情况下可以适当放宽，如磺胺嘧啶钠注射液的pH值为9.5～11.0，葡萄糖注射液的pH值为3.2～5.5，葡萄糖氯化钠注射液的pH值为3.5～5.5，注射用奥美拉唑的碱度范围为pH9.0～11.5。具体注射剂品种的pH值的确定主要依据以下三个方面，首先是满足临床需要，其次是满足制剂制备、贮藏和使用时的稳定性，最后要满足人体生理可承受性。凡大量静脉注射或滴注的输液，应调节其渗透压与血浆渗透压相等或接近。凡在水溶液中不稳定的药物常制成注射用灭菌粉末即无菌冻干粉针或无菌粉末
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分装粉针，以保证注射剂在贮存期内稳定、安全、有效。
为了达到上述质量要求，在注射剂制备过程中，除了生产操作区符合GMP要求、操作者严格遵守GMP规程外，药物、附加剂及溶剂等均需符合注射用质量标准，其处方必须采用法定处方，其制备方法必须严格遵守拟定的产品生产工艺规程，不得随意更改。
三、实验内容与操作
1． 处方
维生素C 5.0g
碳酸氢钠 约2.4g （调pH5.0-7.0）
乙二胺四乙酸二钠 0.005g 焦亚硫酸钠 0.2g
注射用水 加至100ml
2． 工艺流程
搅拌 NaHCO3 pH5.0～7.0 焦亚硫酸钠 80ml新沸水+VC 溶液 溶液 分次缓慢加入
溶液 注射用水至100ml 试纸测pH 溶液 微孔滤膜过滤（0.45μm）
安瓿 常水洗2次 去离子水洗2次 干燥（250℃） 放冷 通CO2
灌装（2.15ml） 通CO2 封口 灭菌（100℃15min） 3． 操作
（1） 空安瓿的处理
空安瓿在用前先用常水冲刷外壁，然后将安瓿中灌入常水甩洗 2 次（如果安瓿清洁度差，须用0.5%醋酸或盐酸溶液灌满，100℃加热30min），再用过滤的蒸馏水或去离子水甩洗两次，最后用澄明度合格的注射用水洗一次，120~140℃烘干，备用。 （2）注射液的配制
1） 容器处理：配制用的一切容器使用前要用洗涤剂或硫酸清洁液处理洗净，临用前用新鲜注射用水荡洗，以避免引入杂质及热原。
2） 滤器等的处理
垂熔玻璃滤器：常用的垂熔玻璃滤器有漏斗和滤球，G3号可用于常压过滤，G4
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号可用于减压或加压过滤，G6号可用于除菌过滤。处理时可先用水反冲，除去上次滤过留下的杂质，沥干后用洗液（1-2%硝酸钠硫酸洗液）浸泡处理，用水冲洗干净，最后用注射用水过滤，至滤出水检查pH值不显酸性，并检查澄明度至合格为止。
微孔滤膜：常用的是由醋酸纤维素、硝酸纤维素混合酯组成的微孔滤膜。经检查合格的微孔滤膜（0.22μm可用于除菌滤过、0.45μm可用于一般滤过）浸泡于注射用水中1h，煮沸5min，如此反复三次；或用80℃注射用水温浸 4h以上，室温则需浸泡12h，使滤膜中纤维充分膨胀，增加滤膜韧性。使用时用镊子取出滤膜且使毛面向上，平放在膜滤器的支撑网上，平放时注意滤膜不皱摺或无刺破，使滤膜与支撑网边缘对齐以保证无缝隙，无泄漏现象，装好盖后，用注射用水过滤，滤出水澄明度合格，即可备用。
乳胶管：先用水揉洗，再用0.5%-1%氢氧化钠液适量,煮沸30min,洗去碱液；再用0.5%-1%盐酸水适量,煮沸30min,用蒸馏水洗至中性,再用注射用水煮沸即可。
3)惰性气体处理：因维生素C极易氧化,故配制时需通惰性气体,常用的是二氧化碳或氮。使用纯度较低的二氧化碳时依次通过分别装有浓硫酸除去水分、1%硫酸铜除去有机硫化物、1%高锰酸钾溶液除去微生物，最后通过注射用水，除去可溶性杂质和二氧化硫。目前生产常用的高纯氮（含N299.99%），可不经处理，或仅分别通过50%甘油、注射用水洗气瓶即可使用。
二氧化碳在水中溶解度及密度都大于氮气，故药物与二氧化碳不发生作用时通入二氧化碳比通入氮气好，但注意二氧化碳会使药液的pH值下降，要考虑到pH值对药物稳定性的影响，故对酸敏感的药物不宜通二氧化碳。
4）配液：取注射用水120ml，煮沸，放置至室温，或通入二氧化碳（约20-30min）使其饱和，以除去溶解其中的氧气，备用。按处方，称取乙二胺四乙酸二钠加入于处方量80%的注射用水中，溶解，加维生素C使溶解，分次缓慢地加入碳酸氢钠固体，不断搅拌至完全溶解，继续搅拌至无气泡产生后，加焦亚硫酸钠溶解，加碳酸氢钠固体调节药液pH值至5.8-6.2，最后加用二氧化碳饱和的注射用水至全量。用G3垂熔玻璃漏斗预滤,再用0.45μm孔径的微孔滤膜精滤,检查滤液澄明度，合格后即可灌装。 （3）灌封
1） 灌封器的处理：首先要检查灌注器玻璃活塞是否严密不漏水，用洗液浸泡再分别用常水、蒸馏水抽洗灌装器直至不显酸性，最后用注射用水抽洗至流出水澄明度检查合格，即可用于灌装药液。
2） 装量调节：在灌装前先调节灌注器装量，按中国药典2000年版的规定，为了保证在使用时能够满足临床剂量要求，应适当增加装量。不同标示装量应增加的
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装量见表1。
表1 注射液的装量 标示装量 增加装量（ml） （ml） 0.5 1.0 2.0 5.0 易流动液 粘稠液 0.1 0.1 0.15 0.3 0.12 0.15 0.25 0.5 标示装量 增加装量 （ml） （ml） 10.0 20.0 50.0 易流动液 0.50 0.60 1.00 粘稠液 0.70 0.90 1.5 3） 熔封灯火焰调节：熔封时要求火焰细而有力，燃烧完全。单焰灯在黄蓝两层火焰交界处温度最高；双焰灯的两火焰应有一定夹角，火焰交点处温度最高。
4） 灌装操作：将过滤合格的药液，立即灌装于2ml安瓿中，2.15ml/支，通入二氧化碳于安瓿上部空间，随灌随封。灌装时要求装量准确、药液不沾颈壁，以免熔封时产生焦头。一般措施是使药液瓶略低于灌注器位置，灌注针头先用硅油处理，快拉慢压可以防止焦头。
5） 熔封 熔封分顶封和拉封，因顶封时可能封口不严，近年来已不用。拉封时可将颈部置于火焰温度最高处，掌握好安瓿在火焰中停留时间，待玻璃完全软化，先用镊子夹住顶端慢拉，拉细处继续在火焰上烧片刻，再拉断，避免出现细丝。熔封后的安瓿顶部应圆滑、无尖头或鼓泡等现象。
（4）灭菌与检漏 灌封好的安瓿，应及时灭菌，小容量针剂从配制到灭菌应在12小时内完成，大容量针剂应在4小时内灭菌。小容量针剂可采用100℃流通蒸汽灭菌15min。大容量针剂一般采用115℃热压灭菌30min。灭菌完毕立即将安瓿放入1%亚甲蓝或曙红溶液中，挑出药液被染色的安瓿。将合格安瓿外表面用水洗净，擦干，供质量检查用。 4． 操作注意
（1） 配液时，将碳酸氢钠加入于维生素C溶液中时速度要慢，以防止产生大量气泡使溶液溢出，同时要不断搅拌，以防局部碱性过强，造成维生素C破坏。 （2） 维生素C容易氧化，致使含量下降，颜色变黄，金属离子可加速这一反应过程，同时pH值对其稳定性影响也较大。因此在处方中加入抗氧剂、通入二氧化碳、加入金属离子络合剂，同时加入碳酸氢钠。在制备过程中应避免与金属用具接触。
4．质量检查与评定
（1）装量：按中国药典2000年版二部附录检查方法进行，2ml安瓿检查5支，每
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支装量均不得少于其标示量装量。
（2） 澄明度：按卫生部标准《澄明度检查细则和判断标准》的规定检查。采用伞棚式装置，日光灯，无色溶液注射剂采用照度为1000～2000Lx的装置，有色溶液注射剂采用照度为2000～3000Lx的装置，检品至人眼的距离为20～25cm。取检品数支，擦净安瓿外壁，集中置于伞棚边缘处，手持安瓿颈部使药液轻轻翻转，用目检视药液中有无肉眼可见的玻屑、白点、纤维等异物，结果列于表2中。 （3）pH值测定：应为5.0-7.0（2000年版药典二部附录44页）。
（4）含量测定：按2000年版药典二部附录645页测定，应为标示量的90.0%-110.0%。
（5）热原：取本品依法检查（2000年版药典二部附录106页），剂量按家兔体重每1kg注射2ml，应符合规定。（此项免做）
（6）无菌检查：按中国药典2000年版二部附录检查，应符合规定。（此项免做） （7）颜色：取本品，加水稀释成每1ml中含维生素C 50mg的溶液，照分光光度法（2000年版药典二部附录24页），在420nm的波长处测定，吸收度不得过0.06。
四、 实验结果与讨论
1. 澄明度检查结果见表2。
表2 澄明度检查结果 检查总数
玻屑 纤维 白点 焦头 其它 总数 废品数（支） 合格数 合格率 （支） （%） 2. 将质量检查各项结果进行分析讨论。
五、 思考题
1． 制备易氧化药物的注射液应注意哪些问题？
2． 制备维生素C注射液为什么要通入二氧化碳，不通可以吗？ 3． 制备注射剂的操作要点是什么？
4． 为什么可以采用分光光度法检查颜色，目的是什么？
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