AKTA使用方法

2020-06-05 10:37

AKTA使用方法:阴/阳离子交换柱

(1)buffer都要进行超声除气10min(母液需要用0.45μm过滤膜过滤)。 (2)洗泵。点击Pumps→Start pumpA wash 和Start pump B wash。用QA buffer冲洗pump A,用QB buffer冲洗pump B。

(3)洗系统(管道)。将Conc%B改为100%,点击Start system wash。 (4)改流速,平衡柱子。将System flow的流速改为合适的流速(4mL/min, 2mL/min,0.4mL/min),点击Set flow rate。然后选择柱位。用QBbuffer平衡Q柱4-5个柱体积,再用QAbuffer平衡Q柱4-5个柱体积。 (5)准备收集盘,设置运行程序。准备烧杯收集outlet。

(6)上样,选择A pump上样,当电导上升时waste改为outlet。上样不要进气泡,上样结束后将A pump放入Buffer A。电导下降到约1时,outlet改为waste,停止程序。

(7)Elution, 运行洗脱程序。(设置程序时,一定要勾选using fraction collector) (8)及时将outlet取出并保存好。 (9)收集收集管,并将buffer放回。

Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)

(1)浓缩。将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。 (2)洗泵。用Superdex buffer冲洗pump A。

(3)用Superdex buffer冲洗整个系统(整个系统体系6-8mL)两个柱体积(约10mL左右)。

(4)平衡。用Superdex buffer平衡两个柱体积(柱体积23.65mL)。 (5)准备收集盘,用Superdex buffer冲洗Loop环,设置运行程序。 (6)上样,运行程序。(设置程序时,一定要勾选using fraction collector) (7)根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。 (8)根据分子筛图和SDS-PAGE电泳图,选择最终收集的样品。分装到1.5mL Ep管中,置于-80℃冰箱保存。


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