YSLH-JS-004-01
般取相当于1g、1ml 或10cm2 的供试品, 若供试品中所含的菌数较多时，供试液可酌情减量），加至适量的稀释液中,混匀,过滤。用适量的冲洗液冲洗滤膜。每株试验菌每种培养基至少制备一张滤膜。
若测定需氧菌总数，转移滤膜菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼脂培养基平板上；若测定霉菌和酵母总数，转移滤膜菌面朝上贴于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上。
6.3.4.4薄膜过滤法计数方法验证实验结果见表3
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初始污染菌实验方法验证报告
报告编号：
报告时间：
YSLH-JS-004-01
目录
初始污染菌实验方法验证报告
1、目的
2、概述
3、测试方法与试验结果
4、结论
5、重新验证条件
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1.目的：
参照《中国药典》2015版，通过实验验证检测方法的适用性及计数用培养基的适用性，从而验证现在使用初始污染菌实验方法是否准确合格。
2.概述：
产品型号为26型：批号为：20150101 3.测试方法及检验结果： 3.1实验设备及器材：
该实验使用仪器及器具主要有：灭菌移液管及移液枪吸嘴、无菌小泵管、培养皿、小型蠕动泵、薄膜过滤器、灭菌锅、百级工作台、生物安全柜、电子天平、电热恒温培养箱、霉菌培养箱。
设备名称 灭菌锅 百级工作台 生物安全柜 电子天平 电热恒温培养箱 霉菌培养箱 是否校量 已校量 已校量 已校量 已校量 已校量 已校量 是否在有效期内 在有效期内 在有效期内 在有效期内 在有效期内 在有效期内 在有效期内 结论 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 符合要求 确认人/日期： 审核/日期： 3.2使用材料及菌种：胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培对照养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉（菌种购买单位均为微生物种质资源库）。
3.3菌液制备：
接种金色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时；接种白色念珠菌的培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20?25℃培养2-3天，上述培养后的新鲜培养物用PH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）的菌悬液。接种黑曲霉的培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养
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基上，20?25℃培养5?7天，加人3?5 ml 0.05%(ml/ml) 聚山梨酯80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.05% (ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0无菌化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu的孢子悬液。
菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2?8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2?8℃，在验证过的贮存期内用。
3.4培养基适用性检查 3.4.1需氧菌的计数
分别取1ml的金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至胰酪大豆胨液体培养基管或胰酪大豆胨琼脂培养基平板。金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌在30-35℃，培养不超过3天；白色念珠菌、黑曲霉在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
3.4.2霉菌和酵母菌的计数
分别取1ml的白色念珠菌、黑曲霉各菌悬液，接种至沙氏葡萄糖琼脂培养基。在20-25℃，培养不超过5天。每一试验菌株平行制备2 管或2 个平皿。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
3.4.3结果判定
被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5-2 范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。
3.4.4试验结果见表1
表1