以保存多年的云南紫苏种子为材料,对其DNA提取和RAPD引物筛选进行了结果。结果表明：从活力很低的紫苏种子提取的DNA也有较高的质量,可以用于RAPD分析;从86个随机引物中筛选出了42个显示紫苏遗传差异的多态性引物。
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第 l卷 7
第2期
云南农业大学学报Jun l f o ra o Ymma gi￣trlU iest n A r dua nvri e y
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l 7
0.2
2 0年 6月 02
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云南紫苏的种子 D A提取和 R P N A D引物筛选龙雯虹郭风根王仕玉，,(1 .云南农业大学园林园艺学院，云南昆明 6 00; 57 1, - 2云南农业大学农学 -生物技术学院， b云南昆明 600 52 1j
摘要：以保存多年的云南紫苏种子为材料，对其 D A提取和 R P N A D引物筛选进行了研究。结果表明：从活力很低的紫苏种子提取的 D A也有较高的质量 N可用于 P P￣ D丹析； 8个随机引物中筛选出了4 A从 6 2个显示紫苏遗传差异的多态性引物
关键词：紫苏；种子； N D A提取：￣ D引物筛选}P L中图分类号： O7—3Q 53; 2文献标识码：A 文章编号： 04—30 020— 19 0 10 9xc 0 )2 00— 3 2
紫苏
蒯Ⅱ
c ( _ rt唇形科㈣ L )Bi t是
过温的研钵中磨碎，入 i5m转 . L的离心管中，加入 03 L的 5 .5m 5℃预热过的 1XD A提取液 (O N 5n,lLTi—H I H7 5 0 mo LEYA p ., uo￣/ r s C .,1 n a/ l H80 p l F07r o L N C,1 B一巯基乙醇，% C A ) 3 . t l a 1% e/ o 1 T B,
(aia)苏届 ( ei的一年生草本植物， Lba e紫 t Prf t a)据《云南植物志》记载，南有 1 2变种-云种。郭凤根等从云南各地收集到 2紫苏品种并进行了多年 o份的栽培和经济性状评估 发现在紫苏种内存在 ,
mn i后加入 2XD A提取液 (度为前者的两倍 ) N浓，
着丰富的遗传变异，并且已用形态聚类分析的方法对云南境内紫苏的种下变异进行了探讨，其分为将 5变种。由于形态特征是基因型和环境相互个作用的产物，紫苏的形态聚类分析结果仅从表现型上间接地反映出了云南境内紫苏的遗传多样性。 试验以云南紫苏种子为材料，究了紫苏基因组研 D A的提取和 R P N A D引物筛选，从 D A多态性
为 N角度直接揭示云南紫苏的遗传多样性奠定了基础。1材料与方法
放入 5培养箱中过夜，问颠倒数次，入 07 5其加 . m L饱和酚，自制的混匀器 ( mn上混匀抽提 3在 2/ i) r h6 0 mn下离心 1 i,上清液转入至另一， 0r i 0/ 0mn将管中，入 03 L饱和酚和 03加 .5m .5mL氯仿一异戊醇 (4 i抽提 2h600rrn下离一 1 i.上 2:), a 0/i t 0mn取 l,清液至另一管中，入 07m加 . L氯仿一异戊醇 (4: 2 i抽提 2, 00rmn下离心 1 hn取上清液至 ) h 6 0 i/ 0t, i另一管中，加入 00 m o LN A和 07m .7 L3m] ae/ . L异丙醇，温下沉淀 3 i, 0 nn下离心 5 i,室 0mn3 0r f 0/i mn弃上清液， 7%酒精洗涤 D A,干后加入 10用 0 N晾 0T E溶解。
11供试材料 .用 2已保存 7年的收集自云南 l县 0份~8 8个市的紫苏种子作材料提取基因组 D A,中选择 N从分属于不同变种的 4份紫苏种子的 D A作 t D N L M￣引物筛选的模板 D A. N12 D A的提取 . N
13 R P . A D引物筛选方法研究所用的 8个 1 6 O碱基随机引物均由 O e pr O公司生产，增反应在美国 P I 1扩 E公司生产的 40 8型 P R仪上进行，余试剂均购自华美生物工程 C其公司。反应条件除总体积改为 1外， O其余都同文献[: 5。扩增产物在 05xT E缓冲液系统下用 . Bl2 %琼脂糖凝胶电泳检测。
紫苏种子 D A的提取参照许明辉改进的提取 N烟草 D A的 C A N T B法 J略有改动，剂均为国产，试分析纯。取 0 1 02种子，于经一2冰箱降 ~ g置 0
收稿 H期： 0 1 0 2 20— 5— 4基金项目：云南省教委自然科学基金课题(0 2 ) 0 H0 1:
作者简介：龙雯虹(92, ( 17一)女彝旗)云南开远市人，,讲师 .硕士、从事蔬菜育种教学和研究工作：