第２期鲜莹等：产胞外蛋白酶菌株的筛选及环境因素对其产酶活性的影响
表ｌ各菌株所产胞外酶对水体中主要形态氦的转化效果
Ｔａｂ．Ｉ
５５
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｂａｃｔｅｒｉａｌｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｌｅｎｚｙｍｅｓ’Ｓｔｒａｎｓｆｒｏｍｅｆｆｉｄｅｎｃｙ
ｏｎ
ａｌｌｋｉｎｄｓｏｆｎｉｔｒｏｇｅｎ
ｃｏｍｐｏｕｎｄ
与对照组相比，两组加入酶液的混合水样组氨
氮的浓度明显高于对照组，硝酸盐少于对照组，亚
硝酸盐和总氮不明显。加入酶液的混合水样中发生了较高水平的氨化作用，在初始浓度与总氮水平几乎一致的条件下，加人酶液的混合水样组生成了更高含量的无机氨氮。这说明相较于对照组，混合水
样中有更多有机氮被转化为氨氮，加入酶液可以促进水体中有机氮物质的减少。实验结果表明，菌株所产胞外蛋白酶对水体中的有机氮的转化具有催化促进作用，可以用于净化水质。
另外，通过检验ＰＲ０９菌株还具有产胞外碱性
磷酸酶的能力。因此综合各步筛选结果，ＰＲ０９菌
株为目的菌株。２．３菌株鉴定
对ＰＲ０９进行形态学鉴定和生理生化鉴定结果显示，该菌株为革兰氏染色阳性菌，所显示特点和芽孢杆菌的特征一致¨ｌ’１‘７｜，鉴定其为芽孢杆菌属。
表２各菌株鉴定
Ｔａｂ．３
Ｉｄｅｎｔｉｆｙｒｅｓｕｌｔｏｆ
ｅｎｚｙｍｅｓ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｂａｃｔｅｒｉａ
注：“＋”表示阳性
温度对ＰＲ０９菌株酶活的影响
各物种所产的蛋白酶在温度和ｐＨ上都有着不同的需求。马宏颖等¨引诱变选育的中性蛋白酶产
生菌ＵＭＮ－２６的最适培养温度为３７℃，最适初始
培养基ｐＨ为６．５。代玉梅等【１９］在沙蚕消化道中筛万方数据
为５０℃，且能耐受６０℃高温；在不同缓冲液中，
其最适ｐＨ有所差异，在Ｔｒｉｓ—ＨＣＬ缓冲体系中最适ｐＨ为８．６，而在硼砂一硼酸缓冲体系中，最适ｐＨ
为７．４。
如图２所示，ＰＲ０９菌株所产的胞外蛋白酶活
性在２７～５７℃区间内趋势变化平缓，而在５７—６７℃区间内，酶活性显著升高，６７℃高温时活性最高。
Ｏ．０６Ｏ．０５
辩０．０４
Ｏ．０２０．Ｏｌ
Ｏ
２７℃
３７℃
４７℃５７℃６７℃
不同温度梯度
图２不同温度培养下胞外蛋白酶吸光度大小的差异
Ｆｉｇ．２
Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
Ｏｎ
ｔｈｅａｂ￥ｏｒｂａｎｃｅｏｆｄｔｌｚｙｍｅ￥
ｐＨ对ＰＲ０９菌株酶活的影响
在培养条件ｐＨ６～９时，ＰＲ０９蛋白酶的活性较高，在ｐＨ７的培养液中，ＰＲ０９菌株所产的蛋白酶活性达到了最高值（图３）。这说明ＰＲ０９产胞外蛋白酶最适ｐＨ为７，属于中性蛋白酶。
０．０４００．０３５０．０３０
肇ｏ．０２５
喜爱酱：
０．０１０Ｏ．００５
０
：ｌ¨５
６
７
耋８
一．¨
９
ｌＯ
不同ｐＨ梯度
图３
不同ｐＨ下胞外蛋白酶活性吸光度大小的差异
Ｆｉｇ．３
ＥｆｆｅｃｔｏｆｐＨ
Ｏｉｌ
ｔｈｅ
ａｂｓｏｒｂａｎｃｅｏｆｅｎｚｙｍｅｓ
（１）实验筛选出一株产蛋白酶和磷酸酶活性的２．３．２
２．３环境条件对ＰＲ０９菌株酶活的影响
２．３．１
选得到的Ｄ２菌株所产蛋白酶的最适产酶温度为２５℃，最适ｐＨ为７．５。詹莉等ｍ１在研究枯草芽孢
杆菌所产的弹性蛋白酶时发现，该酶最适作用温度
３结论
菌株ＰＲ０９，经鉴定为芽孢杆菌。