植物体细胞繁殖及动物细胞增殖及其应用(3)

2020-12-24 22:42

植物体细胞繁殖及动物细胞增殖及其应用

(1)细胞准备。分贴壁和悬浮细胞两种。前者可直接将两亲本细胞混合培养,后者需制成一定浓度的细胞悬浮液。 (2)细胞融合,加促融因子于将行融合的细胞之中,诱导融合。

(3)杂种细胞选择。利用选择性培养基等,使亲本细胞死亡,而让杂种细胞存活。

(4)杂种细胞克隆。对选出的杂种细胞进行克隆(选择与纯化),经过培养,就能获得所需要的无性繁殖系。 诱导细胞融合的方法:

生物方法(病毒)、化学方法(聚乙二醇PEG)、物理方法(离心,震动,电刺激)。某些病毒如:仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白(fusion protein),可介导病毒同宿主细胞融合,也可介导细胞与细胞的融合,因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变,去掉作用因素之后,质膜恢复原有的有序结构,在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。

注:植物细胞融合较动物细胞难些。首先,植物细胞外面有细胞壁,因此需要先用纤维素酶去壁,形成原生质体后,才能进行细胞融合。其次,植物细胞融合后形成的杂种细胞,经过培养有可能分化发育成植株,而动物细胞的杂种细胞则缺乏此种能力。植物体细胞融合的过程大致包括:细胞分离,原生


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