4.4.4.5.2薄膜过滤法：每个滤桶内加入100ml稀释液，按薄膜过滤法过滤，用冲洗液冲洗滤膜，冲洗液、冲洗量及冲洗次数同试验组，在最后一次冲洗液中加入一种试验菌液1ml（含菌50～100CFU），滤过，取出滤膜，菌面朝上贴于相应的经预培养合格的培养基平板上，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌用营养琼脂培养基平板，白色念珠菌、黑曲霉用玫瑰红钠琼脂培养基平板。每株试验菌平行制备2个平板。
4.4.4.6倾注培养基：在菌液组各平皿中分别倾注15～20ml温度不超过45℃的溶化的营养琼脂培养基或玫瑰红钠琼脂培养基，其中，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌用营养琼脂培养基，白色念珠菌、黑曲霉用玫瑰红钠琼脂培养基，混匀，凝固。
4.4.4.7培养观察：用于细菌计数的营养琼脂培养基平板，倒置于30～35℃的培养箱中，培养48小时；用于霉菌、酵母菌计数的玫瑰红钠琼脂培养基平板，倒置于23～28℃的培养箱中，培养72小时。逐日观察菌落生长情况，点计菌落数。
4.4.4.8菌落计数：将平板置菌落计数器上或从平板的背面直接以肉眼点计，以透射光衬以暗色背景，仔细观察并记录结果。
4.4.4.9计算回收率
试验组回收率＝
试验组平均菌落数 供试品对照组平均菌落数
×100%
菌液组的平均菌落数
稀释剂对照组回收率＝
稀释剂对照组的平均菌落数
×100%
菌液组的平均菌落数
4.4.4.10结果判定：在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的回收率应均不低于70％。试验组的菌回收率均不低于70％，则照该供试液制备方法和计数法测定。若任一次试验中试验组的菌回收率低于70％，则应采用薄膜过滤法、培养基稀释法、离心沉淀集菌法、中和法等方法或联合使用上述方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法学验证。
4.4.4.11细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果： 第一次： 样品名称 规格 生产商 试验日期 样品批号 类别 □ 保温振摇法 □ 研钵法 □ 匀浆仪 档 min □ 水溶性供试品：供试品 g(ml)，加稀释剂 ml，制成1： 供试液；取供试液 ml，冲洗次数 次，每膜 冲洗量 ml。 供试液的制备□ 非水溶性供试品：供试品 g(ml)，加乳化剂（名及处理 称 ；批号 ） g(ml)，加稀释剂 ml，制成1： 供试液；取供试液 ml，冲洗次数 次，每膜冲洗量 ml。 □ 其它： 。 技术方法 培养基名称 配制批号 培养温度 培养起止时间 菌种名称菌 菌种编号 菌悬液批号 菌液稀释倍数 试验组1 大肠埃希菌 细菌计数 营养琼脂培养基 金黄色葡萄球 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 霉菌和酵母菌计数 玫瑰红钠琼脂培养基 黑曲霉